中国寄生虫学与寄生虫病杂志
中國寄生蟲學與寄生蟲病雜誌
중국기생충학여기생충병잡지
CHINESE JOURNAL OF PARASITOLOGY AND PARASITIC DISEASES
2005年
6期
437-440
,共4页
章家新%傅玉才%徐晓园%吴统健%曹凤玲
章傢新%傅玉纔%徐曉園%吳統健%曹鳳玲
장가신%부옥재%서효완%오통건%조봉령
阴道毛滴虫%RNA干扰%过氧化物酶%硫氧还蛋白还原酶
陰道毛滴蟲%RNA榦擾%過氧化物酶%硫氧還蛋白還原酶
음도모적충%RNA간우%과양화물매%류양환단백환원매
目的用干扰RNA的方法特异性降解阴道毛滴虫细胞过氧化物酶(Prx)和硫氧还蛋白还原酶(TrxR)的mR-NA,并观察其对虫体生长情况的影响.方法取患者阴道毛滴虫培养,用酚、氯仿法提取其基因组DNA,反转录合成双链RNA(dsRNA)后用RNaseⅢ消化过柱,合成小分子(21～23 bp)干扰RNA(siRNA);由脂质载体介导分A、B、C等3组转染,分别降解毛滴虫细胞Prx、TrxR及Prx+TrxR,转染前的细胞作为对照组(D组);收集转染前、转染后24 h和48 h的毛滴虫细胞,用半定量反转录-PCR(RT-PCR)检测Prx和TrxR的mRNA水平;转染36 h后显微镜下计数并观察细胞活力.结果转染后阴道毛滴虫Prx和TrxR的mRNA水平显著下降,组间细胞的活力差异无统计学意义(P＞0.05),但组间细胞数差异具有统计学意义(P＜0.01),4组的细胞均数:A、B、C、和D组分别为7.2×107/L、14.2×107/L、3.8×107/L和20.3×107/L.结论用干扰RNA的方法可以抑制Prx和TrxR的mRNA水平,对阴道毛滴虫的细胞周期有明显延长作用,而对细胞活力无明显影响.
目的用榦擾RNA的方法特異性降解陰道毛滴蟲細胞過氧化物酶(Prx)和硫氧還蛋白還原酶(TrxR)的mR-NA,併觀察其對蟲體生長情況的影響.方法取患者陰道毛滴蟲培養,用酚、氯倣法提取其基因組DNA,反轉錄閤成雙鏈RNA(dsRNA)後用RNaseⅢ消化過柱,閤成小分子(21～23 bp)榦擾RNA(siRNA);由脂質載體介導分A、B、C等3組轉染,分彆降解毛滴蟲細胞Prx、TrxR及Prx+TrxR,轉染前的細胞作為對照組(D組);收集轉染前、轉染後24 h和48 h的毛滴蟲細胞,用半定量反轉錄-PCR(RT-PCR)檢測Prx和TrxR的mRNA水平;轉染36 h後顯微鏡下計數併觀察細胞活力.結果轉染後陰道毛滴蟲Prx和TrxR的mRNA水平顯著下降,組間細胞的活力差異無統計學意義(P＞0.05),但組間細胞數差異具有統計學意義(P＜0.01),4組的細胞均數:A、B、C、和D組分彆為7.2×107/L、14.2×107/L、3.8×107/L和20.3×107/L.結論用榦擾RNA的方法可以抑製Prx和TrxR的mRNA水平,對陰道毛滴蟲的細胞週期有明顯延長作用,而對細胞活力無明顯影響.
목적용간우RNA적방법특이성강해음도모적충세포과양화물매(Prx)화류양환단백환원매(TrxR)적mR-NA,병관찰기대충체생장정황적영향.방법취환자음도모적충배양,용분、록방법제취기기인조DNA,반전록합성쌍련RNA(dsRNA)후용RNaseⅢ소화과주,합성소분자(21～23 bp)간우RNA(siRNA);유지질재체개도분A、B、C등3조전염,분별강해모적충세포Prx、TrxR급Prx+TrxR,전염전적세포작위대조조(D조);수집전염전、전염후24 h화48 h적모적충세포,용반정량반전록-PCR(RT-PCR)검측Prx화TrxR적mRNA수평;전염36 h후현미경하계수병관찰세포활력.결과전염후음도모적충Prx화TrxR적mRNA수평현저하강,조간세포적활력차이무통계학의의(P＞0.05),단조간세포수차이구유통계학의의(P＜0.01),4조적세포균수:A、B、C、화D조분별위7.2×107/L、14.2×107/L、3.8×107/L화20.3×107/L.결론용간우RNA적방법가이억제Prx화TrxR적mRNA수평,대음도모적충적세포주기유명현연장작용,이대세포활력무명현영향.
