中国医学科学院学报
中國醫學科學院學報
중국의학과학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE
2006年
5期
670-674
,共5页
王晗%刘拥军%韩之波%梁琳慧%吕璐璐%韩忠朝
王晗%劉擁軍%韓之波%樑琳慧%呂璐璐%韓忠朝
왕함%류옹군%한지파%량림혜%려로로%한충조
缺氧诱导因子-1α%短发夹RNA%人乳腺癌细胞系%细胞凋亡%血管内皮生长因子%细胞周期
缺氧誘導因子-1α%短髮夾RNA%人乳腺癌細胞繫%細胞凋亡%血管內皮生長因子%細胞週期
결양유도인자-1α%단발협RNA%인유선암세포계%세포조망%혈관내피생장인자%세포주기
目的 研究靶向针对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的短发夹RNA(shRNA)对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞功能的影响.方法 氯化钴模拟低氧环境.采用RNA干扰技术,构建针对HIF-1α的shRNA真核表达载体,转染MCF-7细胞.RT-PCR检测RNA干扰后MCF-7中血管内皮生长因子(VEGF)表达的变化.实时定量PCR和Western blot技术分别检测HIF-1α mRNA和蛋白质水平.Sub-G1测定、AnnexinV荧光标记和DNA ladder检测细胞凋亡.流式细胞仪检测细胞周期的变化.结果 缺氧后,MCF-7中的HIF-1α表达增加(P＜0.01),而凋亡率较常氧降低(P＜0.05).shRNA转染MCF-7后,HIF-1α的表达下调91.63%(P＜0.01).阿糖胞苷诱导或无凋亡诱导剂时,干扰组凋亡率比未转染组分别增高1.75倍(P＜0.01)和61.31倍(P＜0.01).与未转染组相比,干扰组中的VEGF下调66.8%(P＜0.05).干扰组细胞周期进程也较未转染组减缓.结论 HIF-1α在MCF-7中发挥抗细胞凋亡的作用.本室构建的针对HIF-1α的shRNA能够促进MCF-7凋亡,下调VEGF表达,推迟细胞周期.
目的 研究靶嚮針對缺氧誘導因子-1α(HIF-1α)的短髮夾RNA(shRNA)對人乳腺癌細胞繫MCF-7細胞功能的影響.方法 氯化鈷模擬低氧環境.採用RNA榦擾技術,構建針對HIF-1α的shRNA真覈錶達載體,轉染MCF-7細胞.RT-PCR檢測RNA榦擾後MCF-7中血管內皮生長因子(VEGF)錶達的變化.實時定量PCR和Western blot技術分彆檢測HIF-1α mRNA和蛋白質水平.Sub-G1測定、AnnexinV熒光標記和DNA ladder檢測細胞凋亡.流式細胞儀檢測細胞週期的變化.結果 缺氧後,MCF-7中的HIF-1α錶達增加(P＜0.01),而凋亡率較常氧降低(P＜0.05).shRNA轉染MCF-7後,HIF-1α的錶達下調91.63%(P＜0.01).阿糖胞苷誘導或無凋亡誘導劑時,榦擾組凋亡率比未轉染組分彆增高1.75倍(P＜0.01)和61.31倍(P＜0.01).與未轉染組相比,榦擾組中的VEGF下調66.8%(P＜0.05).榦擾組細胞週期進程也較未轉染組減緩.結論 HIF-1α在MCF-7中髮揮抗細胞凋亡的作用.本室構建的針對HIF-1α的shRNA能夠促進MCF-7凋亡,下調VEGF錶達,推遲細胞週期.
목적 연구파향침대결양유도인자-1α(HIF-1α)적단발협RNA(shRNA)대인유선암세포계MCF-7세포공능적영향.방법 록화고모의저양배경.채용RNA간우기술,구건침대HIF-1α적shRNA진핵표체재체,전염MCF-7세포.RT-PCR검측RNA간우후MCF-7중혈관내피생장인자(VEGF)표체적변화.실시정량PCR화Western blot기술분별검측HIF-1α mRNA화단백질수평.Sub-G1측정、AnnexinV형광표기화DNA ladder검측세포조망.류식세포의검측세포주기적변화.결과 결양후,MCF-7중적HIF-1α표체증가(P＜0.01),이조망솔교상양강저(P＜0.05).shRNA전염MCF-7후,HIF-1α적표체하조91.63%(P＜0.01).아당포감유도혹무조망유도제시,간우조조망솔비미전염조분별증고1.75배(P＜0.01)화61.31배(P＜0.01).여미전염조상비,간우조중적VEGF하조66.8%(P＜0.05).간우조세포주기진정야교미전염조감완.결론 HIF-1α재MCF-7중발휘항세포조망적작용.본실구건적침대HIF-1α적shRNA능구촉진MCF-7조망,하조VEGF표체,추지세포주기.
