CAJ | 학술논문

采用PCR方法扩增环形泰勒虫Tams1基因,将扩增产物与pUcm-T载体连接,重组质粒经PCR和双酶切鉴定、测序确认后被亚克隆于pGEX-4T-2表达载体中.构建的表达重组质粒经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、Western blot分析.结果显示,克隆的Tams1基因片段长846 bp,为一个完整的开放阅读框,编码281个氨基酸,与GenBank中的Tams1基因核苷酸同源性在93.6%～99.8%之间;系统进化树分析表明新疆分离株与印度株、毛利塔尼亚株和北非共和国株进化途径一致,与苏丹株、巴林株进化途径相差较远;推测的蛋白质抗原决定簇预测表明,Tams1基因编码的氨基酸具有13个交叉的抗原决定簇;表达的融合蛋白为56 ku,能够被环形泰勒虫多克隆血清所识别,表明该融合蛋白具有较好的反应原性和免疫原性,为进一步开展牛环形泰勒虫的分子生物学诊断、亚单位疫苗和核酸疫苗的研究奠定了可靠的基础.
채용PCR방법확증배형태륵충Tams1기인,장확증산물여pUcm-T재체련접,중조질립경PCR화쌍매절감정、측서학인후피아극륭우pGEX-4T-2표체재체중.구건적표체중조질립경IPTG유도표체후,진행SDS-PAGE、Western blot분석.결과현시,극륭적Tams1기인편단장846 bp,위일개완정적개방열독광,편마281개안기산,여GenBank중적Tams1기인핵감산동원성재93.6%～99.8%지간;계통진화수분석표명신강분리주여인도주、모리탑니아주화북비공화국주진화도경일치,여소단주、파림주진화도경상차교원;추측적단백질항원결정족예측표명,Tams1기인편마적안기산구유13개교차적항원결정족;표체적융합단백위56 ku,능구피배형태륵충다극륭혈청소식별,표명해융합단백구유교호적반응원성화면역원성,위진일보개전우배형태륵충적분자생물학진단、아단위역묘화핵산역묘적연구전정료가고적기출.