广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
2009年
3期
348-350
,共3页
Smad4%结肠肿瘤%真核表达质粒%转染
Smad4%結腸腫瘤%真覈錶達質粒%轉染
Smad4%결장종류%진핵표체질립%전염
目的 构建Smad4真核表达质粒并筛选稳定表达野生型Smad4基因的SW480结肠癌细胞系.方法 提取正常人体胎盘组织总RNA,PCR扩增人野生型Smad4基因,通过DNA重组技术将该基因片段重组于peDNA3.1(+)真核表达载体上,构建peDNA3.1(+)-Smad4重组质粒,通过PCR扩增、酶切电泳分析及DNA测序的方法对重组DNA进行鉴定,脂质体介导方法转染结肠癌细胞系SW480,G418筛选稳定表达株,RT-PCR 方法检测其mRNA表达水平.结果 Smad4基因的PCR电泳结果显示在1700 bp左右有一明显亮带,连接载体后经鉴定证实为人Smad4-cDNA;稳定转染Smad4基因的SW480细胞RT-PCR结果提示Smad4的mRNA表达水平比对照细胞组明显升高.结论 成功扩增野生型Smad4基因,构建Smad4真核表达质粒,并筛选出Smad4基因稳定表达的SW480结肠癌细胞系.
目的 構建Smad4真覈錶達質粒併篩選穩定錶達野生型Smad4基因的SW480結腸癌細胞繫.方法 提取正常人體胎盤組織總RNA,PCR擴增人野生型Smad4基因,通過DNA重組技術將該基因片段重組于peDNA3.1(+)真覈錶達載體上,構建peDNA3.1(+)-Smad4重組質粒,通過PCR擴增、酶切電泳分析及DNA測序的方法對重組DNA進行鑒定,脂質體介導方法轉染結腸癌細胞繫SW480,G418篩選穩定錶達株,RT-PCR 方法檢測其mRNA錶達水平.結果 Smad4基因的PCR電泳結果顯示在1700 bp左右有一明顯亮帶,連接載體後經鑒定證實為人Smad4-cDNA;穩定轉染Smad4基因的SW480細胞RT-PCR結果提示Smad4的mRNA錶達水平比對照細胞組明顯升高.結論 成功擴增野生型Smad4基因,構建Smad4真覈錶達質粒,併篩選齣Smad4基因穩定錶達的SW480結腸癌細胞繫.
목적 구건Smad4진핵표체질립병사선은정표체야생형Smad4기인적SW480결장암세포계.방법 제취정상인체태반조직총RNA,PCR확증인야생형Smad4기인,통과DNA중조기술장해기인편단중조우peDNA3.1(+)진핵표체재체상,구건peDNA3.1(+)-Smad4중조질립,통과PCR확증、매절전영분석급DNA측서적방법대중조DNA진행감정,지질체개도방법전염결장암세포계SW480,G418사선은정표체주,RT-PCR 방법검측기mRNA표체수평.결과 Smad4기인적PCR전영결과현시재1700 bp좌우유일명현량대,련접재체후경감정증실위인Smad4-cDNA;은정전염Smad4기인적SW480세포RT-PCR결과제시Smad4적mRNA표체수평비대조세포조명현승고.결론 성공확증야생형Smad4기인,구건Smad4진핵표체질립,병사선출Smad4기인은정표체적SW480결장암세포계.
