生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2010年
5期
705-710
,共6页
王中胜%袁媛%尉研%曾小涛%郑玉玲%姜永强
王中勝%袁媛%尉研%曾小濤%鄭玉玲%薑永彊
왕중성%원원%위연%증소도%정옥령%강영강
猪链球菌2型%转录调控因子%基因敲除
豬鏈毬菌2型%轉錄調控因子%基因敲除
저련구균2형%전록조공인자%기인고제
目的:构建猪链球菌2型强毒株05ZYH33转录调控因子Rgg的基因敲除突变体,观察其生物学性状,并在动物感染实验中比较敲除株与野生株的毒力差异,为进一步研究猪链球菌转录调控因子在致病中的作用提供实验基础.方法:分别以猪链球菌2型05ZYH33基因组和pSET1质粒为模板,扩增基因SSU05_1997两侧各约500 bp的片段为上下游同源臂,氨霉素(Cm)抗性基因为中间片段,采用重叠PCR方法连接3个片段;连接产物先克隆到T载体上,再经过酶切克隆到温度敏感自杀载体pSET4S上;将构建的基因敲除载体pSET4S-1997电转化入05ZYH33感受态细胞,通过改变培养温度筛选出基因敲除突变体05ZYH33Δrgg;对敲除株和野生株的生物学性状及小鼠和猪的致病性进行了初步比较.结果:PCR分析和测序结果均显示基因SSU05_1997完全被Cm抗性基因所替代,基因敲除突变体构建成功;05ZYH33Δrgg对小鼠和猪的致病性与野生株相比无明显差异.结论:转录调控因子Rgg可能和猪链球菌2型的毒力无关.
目的:構建豬鏈毬菌2型彊毒株05ZYH33轉錄調控因子Rgg的基因敲除突變體,觀察其生物學性狀,併在動物感染實驗中比較敲除株與野生株的毒力差異,為進一步研究豬鏈毬菌轉錄調控因子在緻病中的作用提供實驗基礎.方法:分彆以豬鏈毬菌2型05ZYH33基因組和pSET1質粒為模闆,擴增基因SSU05_1997兩側各約500 bp的片段為上下遊同源臂,氨黴素(Cm)抗性基因為中間片段,採用重疊PCR方法連接3箇片段;連接產物先剋隆到T載體上,再經過酶切剋隆到溫度敏感自殺載體pSET4S上;將構建的基因敲除載體pSET4S-1997電轉化入05ZYH33感受態細胞,通過改變培養溫度篩選齣基因敲除突變體05ZYH33Δrgg;對敲除株和野生株的生物學性狀及小鼠和豬的緻病性進行瞭初步比較.結果:PCR分析和測序結果均顯示基因SSU05_1997完全被Cm抗性基因所替代,基因敲除突變體構建成功;05ZYH33Δrgg對小鼠和豬的緻病性與野生株相比無明顯差異.結論:轉錄調控因子Rgg可能和豬鏈毬菌2型的毒力無關.
목적:구건저련구균2형강독주05ZYH33전록조공인자Rgg적기인고제돌변체,관찰기생물학성상,병재동물감염실험중비교고제주여야생주적독력차이,위진일보연구저련구균전록조공인자재치병중적작용제공실험기출.방법:분별이저련구균2형05ZYH33기인조화pSET1질립위모판,확증기인SSU05_1997량측각약500 bp적편단위상하유동원비,안매소(Cm)항성기인위중간편단,채용중첩PCR방법련접3개편단;련접산물선극륭도T재체상,재경과매절극륭도온도민감자살재체pSET4S상;장구건적기인고제재체pSET4S-1997전전화입05ZYH33감수태세포,통과개변배양온도사선출기인고제돌변체05ZYH33Δrgg;대고제주화야생주적생물학성상급소서화저적치병성진행료초보비교.결과:PCR분석화측서결과균현시기인SSU05_1997완전피Cm항성기인소체대,기인고제돌변체구건성공;05ZYH33Δrgg대소서화저적치병성여야생주상비무명현차이.결론:전록조공인자Rgg가능화저련구균2형적독력무관.
