同济大学学报（医学版）
同濟大學學報（醫學版）
동제대학학보（의학판）
JOURNAL OF TONGJI UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCE)
2011年
4期
1-4
,共4页
张明珠%王丹%赵有光%俞光荣
張明珠%王丹%趙有光%俞光榮
장명주%왕단%조유광%유광영
可诱导慢病毒shRNA栽体%TGIF%TGF-β信号通路%Tet-on系统
可誘導慢病毒shRNA栽體%TGIF%TGF-β信號通路%Tet-on繫統
가유도만병독shRNA재체%TGIF%TGF-β신호통로%Tet-on계통
目的 构建针对同源域蛋白TGIF(5′-TG-3′interacting factor)可诱导表达shRNA的慢病毒载体,鉴定其在大肠癌细胞系DLD1中对TGIF的基因沉默效率,进一步研究其对TGF-β信号通路下游基因的影响.方法 设计并合成针对TGIF的RNA干扰序列,克隆到可被强力霉素诱导的新型Tet-on慢病毒载体,将慢病毒颗粒感染大肠癌细胞系DLD1细胞.培养并分离细胞克隆后,使用强力霉素(doxcycline)进行诱导,用Real-Time PCR和Western印迹法检测TGIF和PAI-1的表达情况.结果 构建了针对TGIF可诱导shRNA的真核表达病毒载体并获得相应的病毒,病毒可以高效感染大肠癌细胞系DLD1.在强力霉素诱导下,TGIF在DLD1细胞系的表达得到有效抑制,TGF-β下游基因PAI-1和p15表达明显升高.结论本研究成功构建了可诱导表达shRNA慢病毒载体,其在强力霉素诱导下可以有效抑制TGIF在大肠癌细胞系内的表达；TGIF可以抑制TGF-β信号传导通路.
目的 構建針對同源域蛋白TGIF(5′-TG-3′interacting factor)可誘導錶達shRNA的慢病毒載體,鑒定其在大腸癌細胞繫DLD1中對TGIF的基因沉默效率,進一步研究其對TGF-β信號通路下遊基因的影響.方法 設計併閤成針對TGIF的RNA榦擾序列,剋隆到可被彊力黴素誘導的新型Tet-on慢病毒載體,將慢病毒顆粒感染大腸癌細胞繫DLD1細胞.培養併分離細胞剋隆後,使用彊力黴素(doxcycline)進行誘導,用Real-Time PCR和Western印跡法檢測TGIF和PAI-1的錶達情況.結果 構建瞭針對TGIF可誘導shRNA的真覈錶達病毒載體併穫得相應的病毒,病毒可以高效感染大腸癌細胞繫DLD1.在彊力黴素誘導下,TGIF在DLD1細胞繫的錶達得到有效抑製,TGF-β下遊基因PAI-1和p15錶達明顯升高.結論本研究成功構建瞭可誘導錶達shRNA慢病毒載體,其在彊力黴素誘導下可以有效抑製TGIF在大腸癌細胞繫內的錶達；TGIF可以抑製TGF-β信號傳導通路.
목적 구건침대동원역단백TGIF(5′-TG-3′interacting factor)가유도표체shRNA적만병독재체,감정기재대장암세포계DLD1중대TGIF적기인침묵효솔,진일보연구기대TGF-β신호통로하유기인적영향.방법 설계병합성침대TGIF적RNA간우서렬,극륭도가피강력매소유도적신형Tet-on만병독재체,장만병독과립감염대장암세포계DLD1세포.배양병분리세포극륭후,사용강력매소(doxcycline)진행유도,용Real-Time PCR화Western인적법검측TGIF화PAI-1적표체정황.결과 구건료침대TGIF가유도shRNA적진핵표체병독재체병획득상응적병독,병독가이고효감염대장암세포계DLD1.재강력매소유도하,TGIF재DLD1세포계적표체득도유효억제,TGF-β하유기인PAI-1화p15표체명현승고.결론본연구성공구건료가유도표체shRNA만병독재체,기재강력매소유도하가이유효억제TGIF재대장암세포계내적표체；TGIF가이억제TGF-β신호전도통로.
