CAJ | 학술논문

带绿色荧光蛋白标签的人细胞分裂周期蛋白25同源蛋白的真核表达及其生物学功能研究
대록색형광단백표첨적인세포분렬주기단백25동원단백적진핵표체급기생물학공능연구
Eukaryotic Expression of EGFP-Tagged Human Cell Division Cyclin 25 Homolog C and its Biological Function Detection

万方数据

生物技术通讯生物技術通訊 생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2012年 2期 162-165 ,共4页

吕锦晶%范忠义%徐小洁%张浩%丁丽华%程龙%蒋凯%杜楠%宋良文%徐天昊%叶棋浓

려금정%범충의%서소길%장호%정려화%정룡%장개%두남%송량문%서천호%협기농

人细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C%真核表达%显性负性作用%细胞周期人細胞分裂週期蛋白25同源蛋白C%真覈錶達%顯性負性作用%細胞週期
인세포분렬주기단백25동원단백C%진핵표체%현성부성작용%세포주기

目的:构建带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标签的人细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(cdc25c)基因的真核表达载体pEGFP-cdc25c,并检测其在人胚肾293T细胞中的表达定位情况及生物学功能.方法:采用PCR技术从实验室已有质粒中扩增人cdc25c基因,并将其克隆到pEGFP-C1载体中；将重组质粒转染人胚肾293T细胞,Western印迹检测转染细胞的表达情况,荧光显微镜观察cdc25c蛋白在细胞中的定位,并利用cdc2 Tyr15位特异性抗体验证EGFP-cdc25c作为磷酸酯酶的生物学功能.结果:双酶切和测序鉴定表明,pEGFP-cdc25c真核表达质粒构建成功；转染293T细胞后获得表达,在荧光显微镜下,表达阳性的细胞呈绿色,并定位于细胞质；Western印迹结果表明,EGFP-cdc25c能增加cdc2 Tyr15位的磷酸化水平,起到拮抗内源性cdc25c的功能.结论:构建了带EGFP标签的人cdc25c基因真核表达载体,该载体能够在哺乳动物细胞293T中表达,表达产物定位于细胞质；EGFP-cdc25c能够发挥显性负性作用,为深入研究cdc25c的生物学功能奠定了重要基础.
목적:구건대증강형록색형광단백(EGFP)표첨적인세포분렬주기단백25동원단백C(cdc25c)기인적진핵표체재체pEGFP-cdc25c,병검측기재인배신293T세포중적표체정위정황급생물학공능.방법:채용PCR기술종실험실이유질립중확증인cdc25c기인,병장기극륭도pEGFP-C1재체중；장중조질립전염인배신293T세포,Western인적검측전염세포적표체정황,형광현미경관찰cdc25c단백재세포중적정위,병이용cdc2 Tyr15위특이성항체험증EGFP-cdc25c작위린산지매적생물학공능.결과:쌍매절화측서감정표명,pEGFP-cdc25c진핵표체질립구건성공；전염293T세포후획득표체,재형광현미경하,표체양성적세포정록색,병정위우세포질；Western인적결과표명,EGFP-cdc25c능증가cdc2 Tyr15위적린산화수평,기도길항내원성cdc25c적공능.결론:구건료대EGFP표첨적인cdc25c기인진핵표체재체,해재체능구재포유동물세포293T중표체,표체산물정위우세포질；EGFP-cdc25c능구발휘현성부성작용,위심입연구cdc25c적생물학공능전정료중요기출.