中国普外基础与临床杂志
中國普外基礎與臨床雜誌
중국보외기출여림상잡지
CHINESE JOURNAL OF BASES AND CLINICS IN GENERAL SURGERY
2012年
6期
604-609
,共6页
曾宪成%陈伟%张彤%李华%聂常富%张琪%陈规划3
曾憲成%陳偉%張彤%李華%聶常富%張琪%陳規劃3
증헌성%진위%장동%리화%섭상부%장기%진규화3
人类白细胞抗原-G%RNA干扰%肝癌
人類白細胞抗原-G%RNA榦擾%肝癌
인류백세포항원-G%RNA간우%간암
目的 构建表达人类白细胞抗原-G (HLA-G)基因shRNA载体,探讨其对NK细胞杀伤效应的影响.方法 构建4个HLA-G-shRNA真核表达质粒,瞬时转染至人肝癌Bel-7402细胞,检测HLA-G mRNA和蛋白水平的表达.将NK-92MI细胞(效应细胞)与转染后的Bel-7402细胞(靶细胞)共同培养,以LDH释放法观察不同效靶比时NK-92MI细胞对靶细胞的杀伤效应.结果 经酶切及测序鉴定证实,插入序列与设计的序列相符.RT-PCR和Western blot结果均表明重组载体抑制了Bel-7402细胞HLA-G基因的表达.NK-92MI细胞对转染HLA-GshRNA的Bel-7402细胞杀伤作用明显增强(P＜0.01).封闭NK-92MI细胞KIR2DL4受体后,杀伤作用减弱(P＜0.01).结论 成功构建了HLA-G shRNA载体,下调HLA-G可以增强NK细胞对肝癌细胞的杀伤效应,HLA-G与NK细胞表面KIR2DL4受体结合后,向NK细胞传递抑制效应.
目的 構建錶達人類白細胞抗原-G (HLA-G)基因shRNA載體,探討其對NK細胞殺傷效應的影響.方法 構建4箇HLA-G-shRNA真覈錶達質粒,瞬時轉染至人肝癌Bel-7402細胞,檢測HLA-G mRNA和蛋白水平的錶達.將NK-92MI細胞(效應細胞)與轉染後的Bel-7402細胞(靶細胞)共同培養,以LDH釋放法觀察不同效靶比時NK-92MI細胞對靶細胞的殺傷效應.結果 經酶切及測序鑒定證實,插入序列與設計的序列相符.RT-PCR和Western blot結果均錶明重組載體抑製瞭Bel-7402細胞HLA-G基因的錶達.NK-92MI細胞對轉染HLA-GshRNA的Bel-7402細胞殺傷作用明顯增彊(P＜0.01).封閉NK-92MI細胞KIR2DL4受體後,殺傷作用減弱(P＜0.01).結論 成功構建瞭HLA-G shRNA載體,下調HLA-G可以增彊NK細胞對肝癌細胞的殺傷效應,HLA-G與NK細胞錶麵KIR2DL4受體結閤後,嚮NK細胞傳遞抑製效應.
목적 구건표체인류백세포항원-G (HLA-G)기인shRNA재체,탐토기대NK세포살상효응적영향.방법 구건4개HLA-G-shRNA진핵표체질립,순시전염지인간암Bel-7402세포,검측HLA-G mRNA화단백수평적표체.장NK-92MI세포(효응세포)여전염후적Bel-7402세포(파세포)공동배양,이LDH석방법관찰불동효파비시NK-92MI세포대파세포적살상효응.결과 경매절급측서감정증실,삽입서렬여설계적서렬상부.RT-PCR화Western blot결과균표명중조재체억제료Bel-7402세포HLA-G기인적표체.NK-92MI세포대전염HLA-GshRNA적Bel-7402세포살상작용명현증강(P＜0.01).봉폐NK-92MI세포KIR2DL4수체후,살상작용감약(P＜0.01).결론 성공구건료HLA-G shRNA재체,하조HLA-G가이증강NK세포대간암세포적살상효응,HLA-G여NK세포표면KIR2DL4수체결합후,향NK세포전체억제효응.
