中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2004年
3期
198-201
,共4页
张建琼%魏华%鲁晓萱%鲍海逊%孟继鸿%谢维
張建瓊%魏華%魯曉萱%鮑海遜%孟繼鴻%謝維
장건경%위화%로효훤%포해손%맹계홍%사유
戊型肝炎病毒%噬菌体展示%抗体库
戊型肝炎病毒%噬菌體展示%抗體庫
무형간염병독%서균체전시%항체고
目的获得人源中和性抗戊型肝炎病毒(HEV)单克隆基因工程抗体. 方法采用五轮筛选法(逐轮降低抗原包被量,严格洗脱条件),以固相化的4种含中和抗原表位的HEV 代表株ORF2重组混合抗原淘筛本室构建的HEV 患者外周血源的噬菌体抗体库.获得有特异结合活性的噬菌体抗体,酶切鉴定抗体基因插入.切去噬菌粒上衣壳蛋白gⅢ基因构建表达载体,在大肠杆菌中可溶性表达抗HEV抗体Fab段,ELISA、Western blot检测抗体免疫学活性;测序分析抗体基因. 结果筛选出4株与含中和抗原表位的HEV代表株ORF2重组混合抗原特异结合而与BSA、HBsAg无交叉结合反应的噬菌体抗体,可能为中和抗体.切去gⅢ基因,在大肠杆菌中表达可溶性抗体Fab段,表达量在细菌培养液上清和细菌裂解液中差异无显著性.可溶性抗体与含中和抗原表位的HEV ORF2重组混合抗原有特异结合活性,与BSA、HBsAg无交叉结合反应.Western blot显示在相对分子质量(Mr)略大于45×103处有一明显条带,与Mr 48×103的Fab大小一致.DNA测序分析表明,Fab段VH属于IgG VH3基因家族,VL属于Vκ1基因家族. 结论利用噬菌体抗体库技术成功获得抗HEV的人源单克隆抗体.
目的穫得人源中和性抗戊型肝炎病毒(HEV)單剋隆基因工程抗體. 方法採用五輪篩選法(逐輪降低抗原包被量,嚴格洗脫條件),以固相化的4種含中和抗原錶位的HEV 代錶株ORF2重組混閤抗原淘篩本室構建的HEV 患者外週血源的噬菌體抗體庫.穫得有特異結閤活性的噬菌體抗體,酶切鑒定抗體基因插入.切去噬菌粒上衣殼蛋白gⅢ基因構建錶達載體,在大腸桿菌中可溶性錶達抗HEV抗體Fab段,ELISA、Western blot檢測抗體免疫學活性;測序分析抗體基因. 結果篩選齣4株與含中和抗原錶位的HEV代錶株ORF2重組混閤抗原特異結閤而與BSA、HBsAg無交扠結閤反應的噬菌體抗體,可能為中和抗體.切去gⅢ基因,在大腸桿菌中錶達可溶性抗體Fab段,錶達量在細菌培養液上清和細菌裂解液中差異無顯著性.可溶性抗體與含中和抗原錶位的HEV ORF2重組混閤抗原有特異結閤活性,與BSA、HBsAg無交扠結閤反應.Western blot顯示在相對分子質量(Mr)略大于45×103處有一明顯條帶,與Mr 48×103的Fab大小一緻.DNA測序分析錶明,Fab段VH屬于IgG VH3基因傢族,VL屬于Vκ1基因傢族. 結論利用噬菌體抗體庫技術成功穫得抗HEV的人源單剋隆抗體.
목적획득인원중화성항무형간염병독(HEV)단극륭기인공정항체. 방법채용오륜사선법(축륜강저항원포피량,엄격세탈조건),이고상화적4충함중화항원표위적HEV 대표주ORF2중조혼합항원도사본실구건적HEV 환자외주혈원적서균체항체고.획득유특이결합활성적서균체항체,매절감정항체기인삽입.절거서균립상의각단백gⅢ기인구건표체재체,재대장간균중가용성표체항HEV항체Fab단,ELISA、Western blot검측항체면역학활성;측서분석항체기인. 결과사선출4주여함중화항원표위적HEV대표주ORF2중조혼합항원특이결합이여BSA、HBsAg무교차결합반응적서균체항체,가능위중화항체.절거gⅢ기인,재대장간균중표체가용성항체Fab단,표체량재세균배양액상청화세균렬해액중차이무현저성.가용성항체여함중화항원표위적HEV ORF2중조혼합항원유특이결합활성,여BSA、HBsAg무교차결합반응.Western blot현시재상대분자질량(Mr)략대우45×103처유일명현조대,여Mr 48×103적Fab대소일치.DNA측서분석표명,Fab단VH속우IgG VH3기인가족,VL속우Vκ1기인가족. 결론이용서균체항체고기술성공획득항HEV적인원단극륭항체.
