CAJ | 학술논문

利用离体培养的巨噬细胞(macrophage)低氧培养模型(1%O2,5%CO2),采用2',7'-二氯荧光乙酰乙酸盐(2',7'-dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光分光光度法、Western blotting法和逆转录酶链反应(reversetranscription polymerasechain reaction,RT-PCR)法,观察低氧后细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、IκBα的酪氨酸(Tyr)磷酸化水平、P65 mRNA转录水平以及细胞核内NF-κB(nuclearfactor kappa B)激活量的变化,探讨低氧激活NF-κB信号转导通路的机制.结果表明,低氧后细胞内ROS水平、IκBα的Tyr磷酸化水平和细胞核内NF-κB的激活量均高于对照组(P＜0.05),并且有时间变化趋势上的先后关系,如先用抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC,500 μmol/L)和Tyr蛋白激酶抑制剂gemstein(200μmol/L)预处理,低氧后细胞内IκBα的Tyr磷酸化和NF-κB活化分别比单纯低氧组下降(P＜0.01);另外,低氧后P65 mRNA转录水平也明显增加(P＜0.01).以上结果提示,低氧可能通过细胞内产生ROS,使IκBα的Tyr位点磷酸化,进而使NF-κB活化;另外,NF-κB活性调节除受抑制性亚基IκBα的磷酸化调控外,还可能表现在NF-κB分子各亚基基因自身的转录调控上.
이용리체배양적거서세포(macrophage)저양배양모형(1%O2,5%CO2),채용2',7'-이록형광을선을산염(2',7'-dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)형광분광광도법、Western blotting법화역전록매련반응(reversetranscription polymerasechain reaction,RT-PCR)법,관찰저양후세포내활성양(reactive oxygen species,ROS)수평、IκBα적락안산(Tyr)린산화수평、P65 mRNA전록수평이급세포핵내NF-κB(nuclearfactor kappa B)격활량적변화,탐토저양격활NF-κB신호전도통로적궤제.결과표명,저양후세포내ROS수평、IκBα적Tyr린산화수평화세포핵내NF-κB적격활량균고우대조조(P＜0.05),병차유시간변화추세상적선후관계,여선용항양화제N-을선반광안산(N-acetylcysteine,NAC,500 μmol/L)화Tyr단백격매억제제gemstein(200μmol/L)예처리,저양후세포내IκBα적Tyr린산화화NF-κB활화분별비단순저양조하강(P＜0.01);령외,저양후P65 mRNA전록수평야명현증가(P＜0.01).이상결과제시,저양가능통과세포내산생ROS,사IκBα적Tyr위점린산화,진이사NF-κB활화;령외,NF-κB활성조절제수억제성아기IκBα적린산화조공외,환가능표현재NF-κB분자각아기기인자신적전록조공상.