中国肿瘤生物治疗杂志
中國腫瘤生物治療雜誌
중국종류생물치료잡지
CHINESE JOURNAL OF CANCER BIOTHERAPY
2009年
1期
12-17
,共6页
殷咏梅%束永前%陈晓锋%李薇%刘凌翔%韩晓
慇詠梅%束永前%陳曉鋒%李薇%劉凌翔%韓曉
은영매%속영전%진효봉%리미%류릉상%한효
肿瘤坏死因子-α%血管内皮细胞生长因子%激活蛋白-1%c-Jun'N末端激酶
腫瘤壞死因子-α%血管內皮細胞生長因子%激活蛋白-1%c-Jun'N末耑激酶
종류배사인자-α%혈관내피세포생장인자%격활단백-1%c-Jun'N말단격매
目的: 探讨肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α, TNF-α)诱导血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的机制.方法:以20 ng/ml TNF-α处理MCF-7细胞,用Western blotting检测MAPK(JNK,p38,ERK)信号通路中蛋白磷酸化水平的变化以及AP-1家族(c-Jun,Jun-B,c-Fos,Fra-1,Fra-2,JunD)的蛋白表达及磷酸化水平的变化;以免疫共沉淀法检测激活后的AP-1存在形式;以RT-PCR以及Western blotting检测VEGF mRNA和蛋白表达水平;以MAPK抑制剂预处理后,检测VEGF蛋白表达水平;运用ChIP的方法验证p-c-Jun结合在VEGF启动子区.结果:TNF-α通过激活JNK信号转导通路活化AP-1;被TNF-α激活后AP-1以p-c-Jun-c-Jun和p-c-Jun-JunB同源二聚体形式存在;TNF-α通过激活转录因子AP-1促进VEGF的转录,并增强VEGF的蛋白表达水平;p-c-jun通过与VEGF启动子AP-1结合参与对VEGF转录的调控.结论:在TNF-α作用下,AP-1通过p-c-jun同源二聚体结合在VEGF启动子的AP-1结合位点上,直接对VEGF转录进行调控.
目的: 探討腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor-α, TNF-α)誘導血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)錶達的機製.方法:以20 ng/ml TNF-α處理MCF-7細胞,用Western blotting檢測MAPK(JNK,p38,ERK)信號通路中蛋白燐痠化水平的變化以及AP-1傢族(c-Jun,Jun-B,c-Fos,Fra-1,Fra-2,JunD)的蛋白錶達及燐痠化水平的變化;以免疫共沉澱法檢測激活後的AP-1存在形式;以RT-PCR以及Western blotting檢測VEGF mRNA和蛋白錶達水平;以MAPK抑製劑預處理後,檢測VEGF蛋白錶達水平;運用ChIP的方法驗證p-c-Jun結閤在VEGF啟動子區.結果:TNF-α通過激活JNK信號轉導通路活化AP-1;被TNF-α激活後AP-1以p-c-Jun-c-Jun和p-c-Jun-JunB同源二聚體形式存在;TNF-α通過激活轉錄因子AP-1促進VEGF的轉錄,併增彊VEGF的蛋白錶達水平;p-c-jun通過與VEGF啟動子AP-1結閤參與對VEGF轉錄的調控.結論:在TNF-α作用下,AP-1通過p-c-jun同源二聚體結閤在VEGF啟動子的AP-1結閤位點上,直接對VEGF轉錄進行調控.
목적: 탐토종류배사인자(tumor necrosis factor-α, TNF-α)유도혈관내피생장인자(vascular endothelial growth factor,VEGF)표체적궤제.방법:이20 ng/ml TNF-α처리MCF-7세포,용Western blotting검측MAPK(JNK,p38,ERK)신호통로중단백린산화수평적변화이급AP-1가족(c-Jun,Jun-B,c-Fos,Fra-1,Fra-2,JunD)적단백표체급린산화수평적변화;이면역공침정법검측격활후적AP-1존재형식;이RT-PCR이급Western blotting검측VEGF mRNA화단백표체수평;이MAPK억제제예처리후,검측VEGF단백표체수평;운용ChIP적방법험증p-c-Jun결합재VEGF계동자구.결과:TNF-α통과격활JNK신호전도통로활화AP-1;피TNF-α격활후AP-1이p-c-Jun-c-Jun화p-c-Jun-JunB동원이취체형식존재;TNF-α통과격활전록인자AP-1촉진VEGF적전록,병증강VEGF적단백표체수평;p-c-jun통과여VEGF계동자AP-1결합삼여대VEGF전록적조공.결론:재TNF-α작용하,AP-1통과p-c-jun동원이취체결합재VEGF계동자적AP-1결합위점상,직접대VEGF전록진행조공.
