CAJ | 학술논문

目的:采用分子量为30 KD的聚乙二醇(PEG)对干扰素α2b进行N端定点修饰获得聚乙二醇干扰素α2b(PEG-IFNα2b),并建立PEG-IFNα2b的质控方法.方法:采用Wish细胞-VSV病毒系统,以细胞病变抑制法(CPE)测定PEG-IFNα2b的生物学活性,Lowry法测定蛋白含量,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子质量,高效液相凝胶过滤色谱法测定纯度,胰蛋白酶消化法测定肽图,紫外分光光度法测定紫外吸收光谱,地高辛(DIG)标记的核酸探针法测定外源性DNA残留量,ELISA法测定宿主茵茵体蛋白残留量.结果:聚乙二醇干扰素α2b的比活性为1.39×107IU·mg-1蛋白,蛋白含量为420μg·ml-1,相对分子质量约为65 000道尔顿,纯度超过99.0%,紫外最大吸收峰约在278 nm波长处,外源性DNA残留量小于100pg/剂量,宿主菌菌体蛋白残留量为0.010 27%.结论:该质控方法可用于聚乙二醇干扰素α2b的检定.
목적:채용분자량위30 KD적취을이순(PEG)대간우소α2b진행N단정점수식획득취을이순간우소α2b(PEG-IFNα2b),병건립PEG-IFNα2b적질공방법.방법:채용Wish세포-VSV병독계통,이세포병변억제법(CPE)측정PEG-IFNα2b적생물학활성,Lowry법측정단백함량,SDS-취병희선알응효전영법측정상대분자질량,고효액상응효과려색보법측정순도,이단백매소화법측정태도,자외분광광도법측정자외흡수광보,지고신(DIG)표기적핵산탐침법측정외원성DNA잔류량,ELISA법측정숙주인인체단백잔류량.결과:취을이순간우소α2b적비활성위1.39×107IU·mg-1단백,단백함량위420μg·ml-1,상대분자질량약위65 000도이돈,순도초과99.0%,자외최대흡수봉약재278 nm파장처,외원성DNA잔류량소우100pg/제량,숙주균균체단백잔류량위0.010 27%.결론:해질공방법가용우취을이순간우소α2b적검정.