生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
10期
109-113
,共5页
金刚%陈鹏%唐向民%周瑞阳
金剛%陳鵬%唐嚮民%週瑞暘
금강%진붕%당향민%주서양
红麻%简并引物%5'RACE%同步克隆
紅痳%簡併引物%5'RACE%同步剋隆
홍마%간병인물%5'RACE%동보극륭
探索利用同一套简并引物结合通用引物同步扩增两个红麻PDIL同源基因的cDNA5’-末端序列,以期为同一转录组中两个旁系同源基因cDNA5' RACE的同步扩增提供借鉴.通过红麻HcPDIL5-2a和HcPDIL5-2b cDNA中间片段及3’-末端已知序列的比时,在其完全保守区段设计了一条引物用于两个基因5' RACE的共反转录；在其部分保守区段设计了两条简并引物,并利用其在两个基因的5'RACE扩增时退火温度的差异,结合通用引物巢式PCR同步扩增两个基因的cDNA 5 ’-末端未知序列.在两个基因全长cDNA拼接序列的基础上设计两对特异引物分别扩增它们的cDNA全长序列,测序结果进一步验证了序列拼接和cDNA 5' RACE同步扩增的可靠性.进化分析证实两个基因属于PDIL基因家族成员.
探索利用同一套簡併引物結閤通用引物同步擴增兩箇紅痳PDIL同源基因的cDNA5’-末耑序列,以期為同一轉錄組中兩箇徬繫同源基因cDNA5' RACE的同步擴增提供藉鑒.通過紅痳HcPDIL5-2a和HcPDIL5-2b cDNA中間片段及3’-末耑已知序列的比時,在其完全保守區段設計瞭一條引物用于兩箇基因5' RACE的共反轉錄；在其部分保守區段設計瞭兩條簡併引物,併利用其在兩箇基因的5'RACE擴增時退火溫度的差異,結閤通用引物巢式PCR同步擴增兩箇基因的cDNA 5 ’-末耑未知序列.在兩箇基因全長cDNA拼接序列的基礎上設計兩對特異引物分彆擴增它們的cDNA全長序列,測序結果進一步驗證瞭序列拼接和cDNA 5' RACE同步擴增的可靠性.進化分析證實兩箇基因屬于PDIL基因傢族成員.
탐색이용동일투간병인물결합통용인물동보확증량개홍마PDIL동원기인적cDNA5’-말단서렬,이기위동일전록조중량개방계동원기인cDNA5' RACE적동보확증제공차감.통과홍마HcPDIL5-2a화HcPDIL5-2b cDNA중간편단급3’-말단이지서렬적비시,재기완전보수구단설계료일조인물용우량개기인5' RACE적공반전록；재기부분보수구단설계료량조간병인물,병이용기재량개기인적5'RACE확증시퇴화온도적차이,결합통용인물소식PCR동보확증량개기인적cDNA 5 ’-말단미지서렬.재량개기인전장cDNA병접서렬적기출상설계량대특이인물분별확증타문적cDNA전장서렬,측서결과진일보험증료서렬병접화cDNA 5' RACE동보확증적가고성.진화분석증실량개기인속우PDIL기인가족성원.
