CAJ | 학술논문

[目的]应用RNAi技术抑制人骨肉瘤MG-63细胞S100A4基因的表达,并观察对MG-63细胞增殖及体外侵袭能力的影响.[方法]合成针对S100A4的siRNA载体,并根据目的mRNA序列,设计3条RNA干扰靶序列及非特异性的siRNA.将培养细胞分为C组(空白对照组)；C1组(转染脂质体组)；C2组(转染非特异性的siRNA 组)；S1、S2、S3组(转染特异性的siRNA Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组).荧光倒置显微镜下观察转染情况,Real-time PCR方法检测转染前后S100A4基因表达变化,应用Western-Blot方法检测转染前后S100A4蛋白表达变化.筛选出转染效率最高的特异性siRNA组作为后续实验的实验组.后续实验分为正常细胞组,阴性对照组和实验组,应用MTT法和平板克隆形成实验检测细胞的增殖率变化,应用Transwell小室实验检测细胞的侵袭及转移能力变化.[结果]倒置显微镜下C2组与S1、S2、S3组培养细胞的细胞浆均可见绿色荧光.S1、S2与S3组的S100A4 mRNA表达水平均有不同程度的下调,以S3组最为显著.Western-Blot检测S100A4蛋白表达结果与其相符.MTT法和平板克隆形成实验均显示S3组细胞增殖受到抑制,与正常细胞组、阴性对照组比较差异有显著性意义(P＜0.05).Transwell小室实验显示RNA干扰S100A4基因表达后肿瘤细胞的运动侵袭能力明显下降,穿过人工基底膜细胞数量明显减少,与正常细胞组、阴性对照组相比差异有显著性意义(P＜0.05).[结论]体外合成的S100A4特异性siRNA能够抑制骨肉瘤细胞系MG-63的S100A4表达,进而抑制细胞的增殖和体外侵袭能力.
[목적]응용RNAi기술억제인골육류MG-63세포S100A4기인적표체,병관찰대MG-63세포증식급체외침습능력적영향.[방법]합성침대S100A4적siRNA재체,병근거목적mRNA서렬,설계3조RNA간우파서렬급비특이성적siRNA.장배양세포분위C조(공백대조조)；C1조(전염지질체조)；C2조(전염비특이성적siRNA 조)；S1、S2、S3조(전염특이성적siRNA Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ조).형광도치현미경하관찰전염정황,Real-time PCR방법검측전염전후S100A4기인표체변화,응용Western-Blot방법검측전염전후S100A4단백표체변화.사선출전염효솔최고적특이성siRNA조작위후속실험적실험조.후속실험분위정상세포조,음성대조조화실험조,응용MTT법화평판극륭형성실험검측세포적증식솔변화,응용Transwell소실실험검측세포적침습급전이능력변화.[결과]도치현미경하C2조여S1、S2、S3조배양세포적세포장균가견록색형광.S1、S2여S3조적S100A4 mRNA표체수평균유불동정도적하조,이S3조최위현저.Western-Blot검측S100A4단백표체결과여기상부.MTT법화평판극륭형성실험균현시S3조세포증식수도억제,여정상세포조、음성대조조비교차이유현저성의의(P＜0.05).Transwell소실실험현시RNA간우S100A4기인표체후종류세포적운동침습능력명현하강,천과인공기저막세포수량명현감소,여정상세포조、음성대조조상비차이유현저성의의(P＜0.05).[결론]체외합성적S100A4특이성siRNA능구억제골육류세포계MG-63적S100A4표체,진이억제세포적증식화체외침습능력.