生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2003年
6期
969-973
,共5页
孙朝晖%赖燕来%曾文文%郭雅南%左焕琮%谢佐平
孫朝暉%賴燕來%曾文文%郭雅南%左煥琮%謝佐平
손조휘%뢰연래%증문문%곽아남%좌환종%사좌평
Shh-N%重组融合蛋白%蛋白质纯化%神经前体细胞%TH免疫阳性神经元
Shh-N%重組融閤蛋白%蛋白質純化%神經前體細胞%TH免疫暘性神經元
Shh-N%중조융합단백%단백질순화%신경전체세포%TH면역양성신경원
为了获得重组Sonic hedgehog N端蛋白(Shh-N)并研究其功能,应用PCR技术扩增Shh-N cDNA,然后克隆至原核表达质粒中,转化E.coli后获得表达菌株, 经1 mmol/L IPTG诱导高效表达出带有His-tag的融合蛋白,其中大部分为可溶性蛋白,少量为包涵体.用His-tag特异性结合树脂纯化可溶性融合蛋白,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一区带,凝胶自动扫描分析表明,Shh-N的纯度达85%以上.纯化后的Shh-N在成纤维生长因子8(FGF8)的协同作用下,能诱导神经前体细胞(NPC)向酪氨酸羟化酶阳性神经元(TH+)发育.在此基础上可以诱导不同类型的人类干细胞定向分化为多巴胺(DA)神经元,从而为临床治疗帕金森病(PD)提供充足的供体细胞.
為瞭穫得重組Sonic hedgehog N耑蛋白(Shh-N)併研究其功能,應用PCR技術擴增Shh-N cDNA,然後剋隆至原覈錶達質粒中,轉化E.coli後穫得錶達菌株, 經1 mmol/L IPTG誘導高效錶達齣帶有His-tag的融閤蛋白,其中大部分為可溶性蛋白,少量為包涵體.用His-tag特異性結閤樹脂純化可溶性融閤蛋白,經SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定為單一區帶,凝膠自動掃描分析錶明,Shh-N的純度達85%以上.純化後的Shh-N在成纖維生長因子8(FGF8)的協同作用下,能誘導神經前體細胞(NPC)嚮酪氨痠羥化酶暘性神經元(TH+)髮育.在此基礎上可以誘導不同類型的人類榦細胞定嚮分化為多巴胺(DA)神經元,從而為臨床治療帕金森病(PD)提供充足的供體細胞.
위료획득중조Sonic hedgehog N단단백(Shh-N)병연구기공능,응용PCR기술확증Shh-N cDNA,연후극륭지원핵표체질립중,전화E.coli후획득표체균주, 경1 mmol/L IPTG유도고효표체출대유His-tag적융합단백,기중대부분위가용성단백,소량위포함체.용His-tag특이성결합수지순화가용성융합단백,경SDS-취병희선알응효전영감정위단일구대,응효자동소묘분석표명,Shh-N적순도체85%이상.순화후적Shh-N재성섬유생장인자8(FGF8)적협동작용하,능유도신경전체세포(NPC)향락안산간화매양성신경원(TH+)발육.재차기출상가이유도불동류형적인류간세포정향분화위다파알(DA)신경원,종이위림상치료파금삼병(PD)제공충족적공체세포.
