世界华人消化杂志
世界華人消化雜誌
세계화인소화잡지
WORLD CHINESE JOURNAL OF DIGESTOLOGY
2008年
6期
602-606
,共5页
柳玉红%李建明%周军%丁彦青
柳玉紅%李建明%週軍%丁彥青
류옥홍%리건명%주군%정언청
蛋白酪氨酸磷酸酶-3%真核表达%绿色荧光蛋白%稳定转染
蛋白酪氨痠燐痠酶-3%真覈錶達%綠色熒光蛋白%穩定轉染
단백락안산린산매-3%진핵표체%록색형광단백%은정전염
目的:构建蛋白酪氨酸磷酸酶-3(PRL-3)绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-N1-PRL-3,为PRL-3基因功能研究奠定基础.方法:设计人PRL-3特异性引物,提取人大肠癌细胞系SW620细胞总RNA,应用RT-PCR方法获取人PRL-3全长cDNA,分别克隆至T载体及真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-N1,应用PCR、酶切及DNA测序进行鉴定,确认后转染大肠癌细胞SW480,应用G418进行筛选获取PRL-3稳定表达细胞克隆,应用荧光定量PCR检测PRL-3基因表达.结果:获得522 bp的PRL-3基因编码序列并成功构建了真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFPN1-PRL-3,该重组载体能够在SW480细胞中稳定表达.结论:成功构建真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-N1-PRL-3和建立PRL-3稳定表达SW480细胞,为进一步深入研究PRL-3基因在大肠癌发生发展中的作用奠定基础.
目的:構建蛋白酪氨痠燐痠酶-3(PRL-3)綠色熒光蛋白真覈錶達載體pEGFP-N1-PRL-3,為PRL-3基因功能研究奠定基礎.方法:設計人PRL-3特異性引物,提取人大腸癌細胞繫SW620細胞總RNA,應用RT-PCR方法穫取人PRL-3全長cDNA,分彆剋隆至T載體及真覈綠色熒光蛋白錶達載體pEGFP-N1,應用PCR、酶切及DNA測序進行鑒定,確認後轉染大腸癌細胞SW480,應用G418進行篩選穫取PRL-3穩定錶達細胞剋隆,應用熒光定量PCR檢測PRL-3基因錶達.結果:穫得522 bp的PRL-3基因編碼序列併成功構建瞭真覈綠色熒光蛋白錶達載體pEGFPN1-PRL-3,該重組載體能夠在SW480細胞中穩定錶達.結論:成功構建真覈綠色熒光蛋白錶達載體pEGFP-N1-PRL-3和建立PRL-3穩定錶達SW480細胞,為進一步深入研究PRL-3基因在大腸癌髮生髮展中的作用奠定基礎.
목적:구건단백락안산린산매-3(PRL-3)록색형광단백진핵표체재체pEGFP-N1-PRL-3,위PRL-3기인공능연구전정기출.방법:설계인PRL-3특이성인물,제취인대장암세포계SW620세포총RNA,응용RT-PCR방법획취인PRL-3전장cDNA,분별극륭지T재체급진핵록색형광단백표체재체pEGFP-N1,응용PCR、매절급DNA측서진행감정,학인후전염대장암세포SW480,응용G418진행사선획취PRL-3은정표체세포극륭,응용형광정량PCR검측PRL-3기인표체.결과:획득522 bp적PRL-3기인편마서렬병성공구건료진핵록색형광단백표체재체pEGFPN1-PRL-3,해중조재체능구재SW480세포중은정표체.결론:성공구건진핵록색형광단백표체재체pEGFP-N1-PRL-3화건립PRL-3은정표체SW480세포,위진일보심입연구PRL-3기인재대장암발생발전중적작용전정기출.
