中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2011年
9期
1676-1681
,共6页
闫承慧%栾波%黄明方%李杰%张效林%韩雅玲
閆承慧%欒波%黃明方%李傑%張效林%韓雅玲
염승혜%란파%황명방%리걸%장효림%한아령
E1A激活基因阻遏子%血管平滑肌细胞%受体,胰岛素样生长因子
E1A激活基因阻遏子%血管平滑肌細胞%受體,胰島素樣生長因子
E1A격활기인조알자%혈관평활기세포%수체,이도소양생장인자
目的:探讨E1A激活基因阻遏子(CREG)抑制人血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的机制.方法:应用逆转录病毒载体pLNCX2-CREG和pSM2-siCREG分别转染VSMCs,G418和puromycin筛选得到稳定转染细胞VSMCs-CREG和VSMCs-siCREG;Western blotting检测转染前后细胞CREG的表达;BrdU和流式细胞术检测CREG表达及对VSMCs增殖的影响.Western blotting和免疫荧光染色检测细胞胰岛素样生长因子Ⅱ受体(IGF2R)的表达;ELISA和RT-PCR检测胰岛素样生长因子Ⅱ(IGFⅡ)的表达;Alexa 488标记重组IGFII内吞实验观察CREG表达对IGFII内吞的影响;重组IGF2R和anti-IGF2R中和抗体阻断实验观察IGF2R-IGFII内吞作用对细胞增殖的影响;Western blotting检测细胞增殖信号分子PI3K/Akt和ERK表达,抑制剂阻断研究分析上述信号分子表达变化在细胞增殖中的作用.结果:实验分别得到VSMCs-CREG和VSMCs-siCREG的细胞克隆,VSMCs-CREG中CREG表达增加,而VSMCs-siCREG中CREG表达减少.VSMCs-CREG细胞增殖较正常对照组明显受抑,VSMCs-siCREG细胞增殖显著增加.VSMCs-CREG细胞中IGF2R蛋白在细胞膜上的表达及分布均显著增加,而VSMCs-siCREG细胞中IGF2R在膜上分布明显下降.CREG过表达促进IGF2R对IGFII的内吞作用,抑制了IGFII的分泌.IGFII分泌增加启动了CREG沉默后VSMCs的增殖,PI3K/Akt和MAPK/ERK信号协同参与了IGFII对VSMCs增殖的调控作用.结论:CREG通过调控IGF2R在细胞膜的分布,加速IGFII内吞作用,抑制了体外培养VSMCs的增殖.
目的:探討E1A激活基因阻遏子(CREG)抑製人血管平滑肌細胞(VSMCs)增殖的機製.方法:應用逆轉錄病毒載體pLNCX2-CREG和pSM2-siCREG分彆轉染VSMCs,G418和puromycin篩選得到穩定轉染細胞VSMCs-CREG和VSMCs-siCREG;Western blotting檢測轉染前後細胞CREG的錶達;BrdU和流式細胞術檢測CREG錶達及對VSMCs增殖的影響.Western blotting和免疫熒光染色檢測細胞胰島素樣生長因子Ⅱ受體(IGF2R)的錶達;ELISA和RT-PCR檢測胰島素樣生長因子Ⅱ(IGFⅡ)的錶達;Alexa 488標記重組IGFII內吞實驗觀察CREG錶達對IGFII內吞的影響;重組IGF2R和anti-IGF2R中和抗體阻斷實驗觀察IGF2R-IGFII內吞作用對細胞增殖的影響;Western blotting檢測細胞增殖信號分子PI3K/Akt和ERK錶達,抑製劑阻斷研究分析上述信號分子錶達變化在細胞增殖中的作用.結果:實驗分彆得到VSMCs-CREG和VSMCs-siCREG的細胞剋隆,VSMCs-CREG中CREG錶達增加,而VSMCs-siCREG中CREG錶達減少.VSMCs-CREG細胞增殖較正常對照組明顯受抑,VSMCs-siCREG細胞增殖顯著增加.VSMCs-CREG細胞中IGF2R蛋白在細胞膜上的錶達及分佈均顯著增加,而VSMCs-siCREG細胞中IGF2R在膜上分佈明顯下降.CREG過錶達促進IGF2R對IGFII的內吞作用,抑製瞭IGFII的分泌.IGFII分泌增加啟動瞭CREG沉默後VSMCs的增殖,PI3K/Akt和MAPK/ERK信號協同參與瞭IGFII對VSMCs增殖的調控作用.結論:CREG通過調控IGF2R在細胞膜的分佈,加速IGFII內吞作用,抑製瞭體外培養VSMCs的增殖.
목적:탐토E1A격활기인조알자(CREG)억제인혈관평활기세포(VSMCs)증식적궤제.방법:응용역전록병독재체pLNCX2-CREG화pSM2-siCREG분별전염VSMCs,G418화puromycin사선득도은정전염세포VSMCs-CREG화VSMCs-siCREG;Western blotting검측전염전후세포CREG적표체;BrdU화류식세포술검측CREG표체급대VSMCs증식적영향.Western blotting화면역형광염색검측세포이도소양생장인자Ⅱ수체(IGF2R)적표체;ELISA화RT-PCR검측이도소양생장인자Ⅱ(IGFⅡ)적표체;Alexa 488표기중조IGFII내탄실험관찰CREG표체대IGFII내탄적영향;중조IGF2R화anti-IGF2R중화항체조단실험관찰IGF2R-IGFII내탄작용대세포증식적영향;Western blotting검측세포증식신호분자PI3K/Akt화ERK표체,억제제조단연구분석상술신호분자표체변화재세포증식중적작용.결과:실험분별득도VSMCs-CREG화VSMCs-siCREG적세포극륭,VSMCs-CREG중CREG표체증가,이VSMCs-siCREG중CREG표체감소.VSMCs-CREG세포증식교정상대조조명현수억,VSMCs-siCREG세포증식현저증가.VSMCs-CREG세포중IGF2R단백재세포막상적표체급분포균현저증가,이VSMCs-siCREG세포중IGF2R재막상분포명현하강.CREG과표체촉진IGF2R대IGFII적내탄작용,억제료IGFII적분비.IGFII분비증가계동료CREG침묵후VSMCs적증식,PI3K/Akt화MAPK/ERK신호협동삼여료IGFII대VSMCs증식적조공작용.결론:CREG통과조공IGF2R재세포막적분포,가속IGFII내탄작용,억제료체외배양VSMCs적증식.
