生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2012年
2期
90-92
,共3页
刘秋英%陈伟%毛国梁%熊盛%钱垂文%利奕成%王一飞
劉鞦英%陳偉%毛國樑%熊盛%錢垂文%利奕成%王一飛
류추영%진위%모국량%웅성%전수문%리혁성%왕일비
骨形成蛋白4%基因克隆%原核表达%pMD18-T载体%pET-22b载体
骨形成蛋白4%基因剋隆%原覈錶達%pMD18-T載體%pET-22b載體
골형성단백4%기인극륭%원핵표체%pMD18-T재체%pET-22b재체
以成熟人胎盘组织为材料来源,克隆人BMP-4基因的全长cDNA,经过PCR扩增后与pMD18-T载体连接,构建pMD18-T-BMP4克隆质粒.酶切后回收小片段与表达载体pET-22b的多克隆酶切位点连接,构建原核表达载体pET22b-BMP4,酶切及测序鉴定重组子.重组质粒转化至感受态的Rosseta宿主菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测蛋白表达情况.结果显示,从胎盘组织中成功地克隆到人BMP4基因,与NCBI中公布的序列100％相符合,原核表达载体pET22b-BMP4转化至Rosseta构建表达菌体,经IPTG诱导后电泳分析可见重组蛋白表达的条带.
以成熟人胎盤組織為材料來源,剋隆人BMP-4基因的全長cDNA,經過PCR擴增後與pMD18-T載體連接,構建pMD18-T-BMP4剋隆質粒.酶切後迴收小片段與錶達載體pET-22b的多剋隆酶切位點連接,構建原覈錶達載體pET22b-BMP4,酶切及測序鑒定重組子.重組質粒轉化至感受態的Rosseta宿主菌,經IPTG誘導錶達,SDS-PAGE檢測蛋白錶達情況.結果顯示,從胎盤組織中成功地剋隆到人BMP4基因,與NCBI中公佈的序列100％相符閤,原覈錶達載體pET22b-BMP4轉化至Rosseta構建錶達菌體,經IPTG誘導後電泳分析可見重組蛋白錶達的條帶.
이성숙인태반조직위재료래원,극륭인BMP-4기인적전장cDNA,경과PCR확증후여pMD18-T재체련접,구건pMD18-T-BMP4극륭질립.매절후회수소편단여표체재체pET-22b적다극륭매절위점련접,구건원핵표체재체pET22b-BMP4,매절급측서감정중조자.중조질립전화지감수태적Rosseta숙주균,경IPTG유도표체,SDS-PAGE검측단백표체정황.결과현시,종태반조직중성공지극륭도인BMP4기인,여NCBI중공포적서렬100％상부합,원핵표체재체pET22b-BMP4전화지Rosseta구건표체균체,경IPTG유도후전영분석가견중조단백표체적조대.
