CAJ | 학술논문

背景与目的: Fas/FasL与口腔鳞癌的发生、发展相关.本研究旨在探讨 cdc25A-Fas嵌合基因表达载体诱导舌鳞癌 Tca8113细胞凋亡的作用.方法:用基因工程方法分别构建 pAdTrack-CMV-cdc25A-Fas( pCCF)和 pAdTrack-cdc25A-Fas( pCF)嵌合基因表达载体;脂质体法将 pCCF、 pCF、 pAdTrack-CMV分别转染 Tca8113细胞;报告基因绿色荧光蛋白( GFP)观察转染效率; Northern blot、 RT-PCR、 Western blot、免疫组化技术检测 Fas基因的转录及表达时序; DNA凝胶电泳带型分析( DNA agarose gel electrophoresis)、原位缺口末端标记 (TUNEL)、 Annexin V、流式细胞仪( flow cytometry, FCM)检测 Tca8113细胞凋亡.结果:( 1)嵌合基因表达载体 pCCF、 pCF转染 Tca8113细胞的转染率为 15%左右,出现在转染后第 5～ 7天.( 2)转染第 3天, pCCF、 pCF组 Fas表达显著上调;第 3、 5、 7天均表达 Fas蛋白, Fas蛋白主要在胞膜和胞浆表达;表达 Fas蛋白的 Tca8113细胞呈现部分凋亡的形态特征. (3)pCCF和 pCF转染 2.5天 (60 h), Tca8113细胞开始出现凋亡,第 3天凋亡率达到最高约 25%,与对照组细胞比较具有显著性差异( P< 0.05), pCCF和 pCF比较无显著性差异( P >0.05). (4)流式细胞仪检测到绿色荧光蛋白表达细胞峰与凋亡细胞峰一致.结论:嵌合基因表达载体 pCCF和 pCF转染口腔鳞癌 Tca8113细胞可诱导细胞凋亡.
배경여목적: Fas/FasL여구강린암적발생、발전상관.본연구지재탐토 cdc25A-Fas감합기인표체재체유도설린암 Tca8113세포조망적작용.방법:용기인공정방법분별구건 pAdTrack-CMV-cdc25A-Fas( pCCF)화 pAdTrack-cdc25A-Fas( pCF)감합기인표체재체;지질체법장 pCCF、 pCF、 pAdTrack-CMV분별전염 Tca8113세포;보고기인록색형광단백( GFP)관찰전염효솔; Northern blot、 RT-PCR、 Western blot、면역조화기술검측 Fas기인적전록급표체시서; DNA응효전영대형분석( DNA agarose gel electrophoresis)、원위결구말단표기 (TUNEL)、 Annexin V、류식세포의( flow cytometry, FCM)검측 Tca8113세포조망.결과:( 1)감합기인표체재체 pCCF、 pCF전 염 Tca8113세포적전염솔위 15%좌우,출현재전염후제 5～ 7천.( 2)전염제 3천, pCCF、 pCF조 Fas표체현저상조;제 3、 5、 7천균표체 Fas단백, Fas단백주요재포막화포장표체;표체 Fas단백적 Tca8113세포정현부분조망적형태특정. (3)pCCF화 pCF전염 2.5천 (60 h), Tca8113세포개시출현조망,제 3천조망솔체도최고약 25%,여대조조세포비교구유현저성차이( P< 0.05), pCCF화 pCF비교무현저성차이( P >0.05). (4)류식세포의검측도록색형광단백표체세포봉여조망세포봉일치.결론:감합기인표체재체 pCCF화 pCF전염구강린암 Tca8113세포가유도세포조망.