郑州大学学报（医学版）
鄭州大學學報（醫學版）
정주대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2007年
2期
286-289
,共4页
范天黎%侯桂琴%许培荣%袁保梅%杨静%刘兰琦%杨观瑞
範天黎%侯桂琴%許培榮%袁保梅%楊靜%劉蘭琦%楊觀瑞
범천려%후계금%허배영%원보매%양정%류란기%양관서
Tet-on%基因表达系统%TAp63γ基因%食管癌%EC9706细胞
Tet-on%基因錶達繫統%TAp63γ基因%食管癌%EC9706細胞
Tet-on%기인표체계통%TAp63γ기인%식관암%EC9706세포
目的:利用Tet-on 基因表达调控系统建立由强力霉素(Dox)诱导TAp63γ基因表达的EC9706细胞系,为进一步研究TAp63γ基因的功能奠定基础.方法:将调控质粒pTet-on 转入EC9706细胞,经G418筛选后的细胞再次转染反应质粒pTRE-TAp63γ-HA,再用潮霉素筛选出阳性细胞克隆,RT-PCR法选择对Dox敏感的细胞克隆.最后用不同浓度Dox诱导,Western blot法确定Dox的最佳诱导浓度.采用此浓度的Dox分别诱导EC9706、EC9706/Tet/pTRE、EC9706/Tet/pTRE-TAp63γ 3组细胞,细胞增殖分析试剂盒(CCK-8试剂盒)检测细胞生长抑制率.结果:Dox浓度为3 mg/L时可诱导TAp63γ基因高表达,EC9706/Tet/pTRE-TAp63γ细胞的生长抑制率均高于EC9706和EC9706/Tet/pTRE细胞(P＜0.05或0.01).结论:成功构建了Tet-on 调控TAp63γ基因表达的EC9706 细胞系,为进一步研究食管鳞癌细胞内P63蛋白的生物学行为提供了一个理想的研究平台.TAp63γ基因表达可使EC9706细胞增殖受到抑制.
目的:利用Tet-on 基因錶達調控繫統建立由彊力黴素(Dox)誘導TAp63γ基因錶達的EC9706細胞繫,為進一步研究TAp63γ基因的功能奠定基礎.方法:將調控質粒pTet-on 轉入EC9706細胞,經G418篩選後的細胞再次轉染反應質粒pTRE-TAp63γ-HA,再用潮黴素篩選齣暘性細胞剋隆,RT-PCR法選擇對Dox敏感的細胞剋隆.最後用不同濃度Dox誘導,Western blot法確定Dox的最佳誘導濃度.採用此濃度的Dox分彆誘導EC9706、EC9706/Tet/pTRE、EC9706/Tet/pTRE-TAp63γ 3組細胞,細胞增殖分析試劑盒(CCK-8試劑盒)檢測細胞生長抑製率.結果:Dox濃度為3 mg/L時可誘導TAp63γ基因高錶達,EC9706/Tet/pTRE-TAp63γ細胞的生長抑製率均高于EC9706和EC9706/Tet/pTRE細胞(P＜0.05或0.01).結論:成功構建瞭Tet-on 調控TAp63γ基因錶達的EC9706 細胞繫,為進一步研究食管鱗癌細胞內P63蛋白的生物學行為提供瞭一箇理想的研究平檯.TAp63γ基因錶達可使EC9706細胞增殖受到抑製.
목적:이용Tet-on 기인표체조공계통건립유강력매소(Dox)유도TAp63γ기인표체적EC9706세포계,위진일보연구TAp63γ기인적공능전정기출.방법:장조공질립pTet-on 전입EC9706세포,경G418사선후적세포재차전염반응질립pTRE-TAp63γ-HA,재용조매소사선출양성세포극륭,RT-PCR법선택대Dox민감적세포극륭.최후용불동농도Dox유도,Western blot법학정Dox적최가유도농도.채용차농도적Dox분별유도EC9706、EC9706/Tet/pTRE、EC9706/Tet/pTRE-TAp63γ 3조세포,세포증식분석시제합(CCK-8시제합)검측세포생장억제솔.결과:Dox농도위3 mg/L시가유도TAp63γ기인고표체,EC9706/Tet/pTRE-TAp63γ세포적생장억제솔균고우EC9706화EC9706/Tet/pTRE세포(P＜0.05혹0.01).결론:성공구건료Tet-on 조공TAp63γ기인표체적EC9706 세포계,위진일보연구식관린암세포내P63단백적생물학행위제공료일개이상적연구평태.TAp63γ기인표체가사EC9706세포증식수도억제.
