中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2008年
2期
125-127
,共3页
毕玉海%曹璐%李志杰%母连志%徐明%丁壮
畢玉海%曹璐%李誌傑%母連誌%徐明%丁壯
필옥해%조로%리지걸%모련지%서명%정장
鹅副粘病毒%鹅细小病毒%F基因%VP3基因%杆状病毒%免疫原性
鵝副粘病毒%鵝細小病毒%F基因%VP3基因%桿狀病毒%免疫原性
아부점병독%아세소병독%F기인%VP3기인%간상병독%면역원성
根据测得的鹅源副粘病毒(GPMV)NA-1株F基因序列,设计1对特异性引物,用作者构建的含F基因的质粒pGF为模板,PCR扩增F基因片段(去除终止密码子),与转座载体pFastBac I连接,构建重组质粒pFastBac-F,并进行测序鉴定;根据测得的鹅细小病毒(GPV)GD-01株VP3基因序列,设计1对特异性引物,用作者构建的重组质粒pGVP3为模板.PCR扩增出有Linker的VP3基因(命名为LVP3).再将重组质粒pFastBac-F与LVP3片段连接,构建重组转座载体pFF-LVP3,转化到DH10Bac宿主菌,将目的基因定向插入到Bacmid质粒中,经筛选获得重组Bacmid F-L-VP3转染S19昆虫细胞,所表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测,特异蛋白分子质量约123 000.将表达蛋白免疫雏鹅,经抗体测定证明,表达的F-VP3重组蛋白能诱导机体产生特异性免疫应答.
根據測得的鵝源副粘病毒(GPMV)NA-1株F基因序列,設計1對特異性引物,用作者構建的含F基因的質粒pGF為模闆,PCR擴增F基因片段(去除終止密碼子),與轉座載體pFastBac I連接,構建重組質粒pFastBac-F,併進行測序鑒定;根據測得的鵝細小病毒(GPV)GD-01株VP3基因序列,設計1對特異性引物,用作者構建的重組質粒pGVP3為模闆.PCR擴增齣有Linker的VP3基因(命名為LVP3).再將重組質粒pFastBac-F與LVP3片段連接,構建重組轉座載體pFF-LVP3,轉化到DH10Bac宿主菌,將目的基因定嚮插入到Bacmid質粒中,經篩選穫得重組Bacmid F-L-VP3轉染S19昆蟲細胞,所錶達產物經SDS-PAGE和Western-blot檢測,特異蛋白分子質量約123 000.將錶達蛋白免疫雛鵝,經抗體測定證明,錶達的F-VP3重組蛋白能誘導機體產生特異性免疫應答.
근거측득적아원부점병독(GPMV)NA-1주F기인서렬,설계1대특이성인물,용작자구건적함F기인적질립pGF위모판,PCR확증F기인편단(거제종지밀마자),여전좌재체pFastBac I련접,구건중조질립pFastBac-F,병진행측서감정;근거측득적아세소병독(GPV)GD-01주VP3기인서렬,설계1대특이성인물,용작자구건적중조질립pGVP3위모판.PCR확증출유Linker적VP3기인(명명위LVP3).재장중조질립pFastBac-F여LVP3편단련접,구건중조전좌재체pFF-LVP3,전화도DH10Bac숙주균,장목적기인정향삽입도Bacmid질립중,경사선획득중조Bacmid F-L-VP3전염S19곤충세포,소표체산물경SDS-PAGE화Western-blot검측,특이단백분자질량약123 000.장표체단백면역추아,경항체측정증명,표체적F-VP3중조단백능유도궤체산생특이성면역응답.
