微生物学通报
微生物學通報
미생물학통보
MICROBIOLOGY
2008年
7期
1078-1083
,共6页
王大鹏%吴清平%姚琳%寇晓霞%张菊梅
王大鵬%吳清平%姚琳%寇曉霞%張菊梅
왕대붕%오청평%요림%구효하%장국매
诺瓦克病毒%VP1%原核表达%产物分析
諾瓦剋病毒%VP1%原覈錶達%產物分析
낙와극병독%VP1%원핵표체%산물분석
诺瓦克病毒(Norovirus,NV)是1972年在美国首次发现的新生病毒,直到1995年国内才有报道.该病毒是严重危害人类健康的重要食源性病毒,可导致不同年龄阶段人群的急性病毒性腹泻.实验以提取临床NV阳性腹泻样本的基因组RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增得到全长为1623 bp编码NV主要衣壳蛋白VP1的ORF2全基因序列.将测序结果进行进化分析,结果表明该病毒属于NV GⅡ.将ORF2亚克隆到原核表达载体pET-28a构建原核表达载体,鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞.经IPTG诱导表达,获得大小约62 kD的融合蛋白并命名为rVP1.以纯化的rVP1免疫新西兰大白兔后制备高免血清,Western Blot结果表明,实验所获得的多克隆抗体可以特异性识别临床样本中NV VP1.因此,rVP1具有良好的免疫原性和反应原性.对小于rVP1的蛋白条带进行Western Blot分析,结果表明所有条带均为rVP1的部分蛋白.双向琼脂扩散试验结果显示实验所获得的高效价多克隆抗体与纯化的原核表达产物仅形成单一沉淀带.
諾瓦剋病毒(Norovirus,NV)是1972年在美國首次髮現的新生病毒,直到1995年國內纔有報道.該病毒是嚴重危害人類健康的重要食源性病毒,可導緻不同年齡階段人群的急性病毒性腹瀉.實驗以提取臨床NV暘性腹瀉樣本的基因組RNA為模闆,採用RT-PCR方法擴增得到全長為1623 bp編碼NV主要衣殼蛋白VP1的ORF2全基因序列.將測序結果進行進化分析,結果錶明該病毒屬于NV GⅡ.將ORF2亞剋隆到原覈錶達載體pET-28a構建原覈錶達載體,鑒定後轉化大腸桿菌BL21(DE3)感受態細胞.經IPTG誘導錶達,穫得大小約62 kD的融閤蛋白併命名為rVP1.以純化的rVP1免疫新西蘭大白兔後製備高免血清,Western Blot結果錶明,實驗所穫得的多剋隆抗體可以特異性識彆臨床樣本中NV VP1.因此,rVP1具有良好的免疫原性和反應原性.對小于rVP1的蛋白條帶進行Western Blot分析,結果錶明所有條帶均為rVP1的部分蛋白.雙嚮瓊脂擴散試驗結果顯示實驗所穫得的高效價多剋隆抗體與純化的原覈錶達產物僅形成單一沉澱帶.
낙와극병독(Norovirus,NV)시1972년재미국수차발현적신생병독,직도1995년국내재유보도.해병독시엄중위해인류건강적중요식원성병독,가도치불동년령계단인군적급성병독성복사.실험이제취림상NV양성복사양본적기인조RNA위모판,채용RT-PCR방법확증득도전장위1623 bp편마NV주요의각단백VP1적ORF2전기인서렬.장측서결과진행진화분석,결과표명해병독속우NV GⅡ.장ORF2아극륭도원핵표체재체pET-28a구건원핵표체재체,감정후전화대장간균BL21(DE3)감수태세포.경IPTG유도표체,획득대소약62 kD적융합단백병명명위rVP1.이순화적rVP1면역신서란대백토후제비고면혈청,Western Blot결과표명,실험소획득적다극륭항체가이특이성식별림상양본중NV VP1.인차,rVP1구유량호적면역원성화반응원성.대소우rVP1적단백조대진행Western Blot분석,결과표명소유조대균위rVP1적부분단백.쌍향경지확산시험결과현시실험소획득적고효개다극륭항체여순화적원핵표체산물부형성단일침정대.
