中国比较医学杂志
中國比較醫學雜誌
중국비교의학잡지
CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE
2008年
8期
4-7,插3
,共5页
王万山%顾为望%朴仲贤%卢康荣
王萬山%顧為望%樸仲賢%盧康榮
왕만산%고위망%박중현%로강영
生长分化因子5%克隆%表达%间充质干细胞%恒河猴,胎儿
生長分化因子5%剋隆%錶達%間充質榦細胞%恆河猴,胎兒
생장분화인자5%극륭%표체%간충질간세포%항하후,태인
目的 克隆人软骨组织生长分化因子5(GDF5)基因及构建GDF5基因真核表达载体,观察其在恒河猴骨髓间充质干细胞(MSCs)中的表达情况.方法 采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从人胎儿软骨组织克隆hGDF5基因全长cDNA,插入pEGFP-C2载体,构建重组真核表达质粒pEGFP-C2-GDF5.重组质粒脂质体介导法转染MSCs细胞,荧光显微镜观察报告基因的表达,RT-PCR法检测目的基因表达.结果 成功克隆人软骨组织GDF5基因和构建GDF5真核表达质粒pEGFP-C2-GDF5,克隆在载体上的基因长度为1 505 bp,包含全部eDNA编码序列1505 bp,测序显示与Genbank上的序列一致.重组质粒转染恒河猴MSCs细胞得到表达,绿色荧光蛋白在转染24 h后开始表达,72 h达高峰,然后表达逐渐减弱.转染后72 h可检测到GDF5 mRNA表达.结论 人GDF5基因在恒河猴MSCs细胞的成功表达为应用恒河猴模型开展基于细胞的基因疗法修复骨和软骨损伤研究奠定了必要基础.
目的 剋隆人軟骨組織生長分化因子5(GDF5)基因及構建GDF5基因真覈錶達載體,觀察其在恆河猴骨髓間充質榦細胞(MSCs)中的錶達情況.方法 採用反轉錄聚閤酶鏈式反應(RT-PCR)從人胎兒軟骨組織剋隆hGDF5基因全長cDNA,插入pEGFP-C2載體,構建重組真覈錶達質粒pEGFP-C2-GDF5.重組質粒脂質體介導法轉染MSCs細胞,熒光顯微鏡觀察報告基因的錶達,RT-PCR法檢測目的基因錶達.結果 成功剋隆人軟骨組織GDF5基因和構建GDF5真覈錶達質粒pEGFP-C2-GDF5,剋隆在載體上的基因長度為1 505 bp,包含全部eDNA編碼序列1505 bp,測序顯示與Genbank上的序列一緻.重組質粒轉染恆河猴MSCs細胞得到錶達,綠色熒光蛋白在轉染24 h後開始錶達,72 h達高峰,然後錶達逐漸減弱.轉染後72 h可檢測到GDF5 mRNA錶達.結論 人GDF5基因在恆河猴MSCs細胞的成功錶達為應用恆河猴模型開展基于細胞的基因療法脩複骨和軟骨損傷研究奠定瞭必要基礎.
목적 극륭인연골조직생장분화인자5(GDF5)기인급구건GDF5기인진핵표체재체,관찰기재항하후골수간충질간세포(MSCs)중적표체정황.방법 채용반전록취합매련식반응(RT-PCR)종인태인연골조직극륭hGDF5기인전장cDNA,삽입pEGFP-C2재체,구건중조진핵표체질립pEGFP-C2-GDF5.중조질립지질체개도법전염MSCs세포,형광현미경관찰보고기인적표체,RT-PCR법검측목적기인표체.결과 성공극륭인연골조직GDF5기인화구건GDF5진핵표체질립pEGFP-C2-GDF5,극륭재재체상적기인장도위1 505 bp,포함전부eDNA편마서렬1505 bp,측서현시여Genbank상적서렬일치.중조질립전염항하후MSCs세포득도표체,록색형광단백재전염24 h후개시표체,72 h체고봉,연후표체축점감약.전염후72 h가검측도GDF5 mRNA표체.결론 인GDF5기인재항하후MSCs세포적성공표체위응용항하후모형개전기우세포적기인요법수복골화연골손상연구전정료필요기출.
