黑龙江八一农垦大学学报
黑龍江八一農墾大學學報
흑룡강팔일농은대학학보
JOURNAL OF HEILONGJIANG AUGUST FIRST LAND RECLAMATION UNIVERSITY
2011年
3期
19-23
,共5页
侯美如%侯喜林%高俊峰%刘振格%王杰%杨明发
侯美如%侯喜林%高俊峰%劉振格%王傑%楊明髮
후미여%후희림%고준봉%류진격%왕걸%양명발
牛轮状病毒%双抗体夹心酶联免疫吸附试验%检测
牛輪狀病毒%雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗%檢測
우륜상병독%쌍항체협심매련면역흡부시험%검측
用差速离心法纯化的牛轮状病毒(BRV)分别免疫鼠和兔,制备了鼠抗BRV和兔抗BRV超免疫血清,并用层析方法进行了纯化,建立了检测BRV的双抗体夹心ELISA方法.该双抗体夹心ELISA的最佳反应条件为:兔抗BRV IgG包被浓度为10μg·mL-1,鼠抗BRV IgG工作浓度为5 μg·mL-1,样品反应时间60 min,酶标抗体工作浓度为1:5 000,以OD450 nm≥0.432作为阳性判定标准.该方法的板间、板内重复性变异系数小于10%,最低检测浓度为1.41 μg·mL-1,并与牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛冠状病毒(BCV)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)等病原无交叉反应.用建立的ELISA方法与BRV RT-PCR方法同时检测40份临床粪便样品,符合率达到95%.结果表明,建立的双抗体夹心ELISA方法具有较好的特异性和较高的敏感性,可用于BRV的快速检测.
用差速離心法純化的牛輪狀病毒(BRV)分彆免疫鼠和兔,製備瞭鼠抗BRV和兔抗BRV超免疫血清,併用層析方法進行瞭純化,建立瞭檢測BRV的雙抗體夾心ELISA方法.該雙抗體夾心ELISA的最佳反應條件為:兔抗BRV IgG包被濃度為10μg·mL-1,鼠抗BRV IgG工作濃度為5 μg·mL-1,樣品反應時間60 min,酶標抗體工作濃度為1:5 000,以OD450 nm≥0.432作為暘性判定標準.該方法的闆間、闆內重複性變異繫數小于10%,最低檢測濃度為1.41 μg·mL-1,併與牛呼吸道閤胞體病毒(BRSV)、牛冠狀病毒(BCV)和牛傳染性鼻氣管炎病毒(IBRV)等病原無交扠反應.用建立的ELISA方法與BRV RT-PCR方法同時檢測40份臨床糞便樣品,符閤率達到95%.結果錶明,建立的雙抗體夾心ELISA方法具有較好的特異性和較高的敏感性,可用于BRV的快速檢測.
용차속리심법순화적우륜상병독(BRV)분별면역서화토,제비료서항BRV화토항BRV초면역혈청,병용층석방법진행료순화,건립료검측BRV적쌍항체협심ELISA방법.해쌍항체협심ELISA적최가반응조건위:토항BRV IgG포피농도위10μg·mL-1,서항BRV IgG공작농도위5 μg·mL-1,양품반응시간60 min,매표항체공작농도위1:5 000,이OD450 nm≥0.432작위양성판정표준.해방법적판간、판내중복성변이계수소우10%,최저검측농도위1.41 μg·mL-1,병여우호흡도합포체병독(BRSV)、우관상병독(BCV)화우전염성비기관염병독(IBRV)등병원무교차반응.용건립적ELISA방법여BRV RT-PCR방법동시검측40빈림상분편양품,부합솔체도95%.결과표명,건립적쌍항체협심ELISA방법구유교호적특이성화교고적민감성,가용우BRV적쾌속검측.
