中国实验诊断学
中國實驗診斷學
중국실험진단학
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY DIAGNOSIS
2011年
12期
2004-2007
,共4页
陈伟%王远志%李永祥%米利古%张辉%张娟%魏克娜%袁俐
陳偉%王遠誌%李永祥%米利古%張輝%張娟%魏剋娜%袁俐
진위%왕원지%리영상%미리고%장휘%장연%위극나%원리
结核分枝杆菌%Ag85B%38kDa%MPT64%实时定量PCR
結覈分枝桿菌%Ag85B%38kDa%MPT64%實時定量PCR
결핵분지간균%Ag85B%38kDa%MPT64%실시정량PCR
目的 运用实时定量PCR(quantitative real-time,qRT-PCR)检测结核分枝杆菌蛋白 Ag85B、38kDa及MPT64编码基因的表达水平,探讨结核分枝杆菌耐药菌株和敏感株,北京基因型和非北京基因型的蛋白抗原在转录水平的差异性及qRT-PCR诊断活菌的价值.方法 根据Genbank提供的序列,设计目的 基因fbpB、psts1、mpt64及内参基因Sigа的特异性引物,将扩增片段克隆入载体pMD18-T simple,重组质粒经纯化及倍比稀释,应用SYBR GreenⅠ荧光染料建立检测fbpB、psts1、mpt64基因表达水平的实时定量PCR方法.选用46株结核分枝杆菌临床分离株,以及2株非结核分枝杆菌.应用qRT-PCR检测上述菌株、H37Rv国际标准株fbpB、psts1、mpt64基因的表达水平.结果 结核分枝杆菌活菌的扩增结果呈典型的S型曲线,而结核分枝杆菌死菌和非结核分枝杆菌呈水平直线,没有检测到荧光信号;耐药组中的mpt64基因表达水平低于敏感组及H37Rv标准株,有统计学意义(t=3.093,P＜0.01;t=2.545,P＜0.05),北京基因型组中的psts1基因表达水平低于非北京基因型组及H37Rv标准株.结论 有统计学意义(t=2.567,P＜0.05;t=2.373,P＜0.05).结论 成功建立了fbpB、psts1、mpt64基因的qRT-PCR检测方法,该方法可以快速判断活菌与死菌.检测发现耐药组中的mpt64基因表达水平低于敏感组及H37Rv标准株;北京基因型组中的psts1基因表达水平低于非北京基因型组及H37Rv标准株.
目的 運用實時定量PCR(quantitative real-time,qRT-PCR)檢測結覈分枝桿菌蛋白 Ag85B、38kDa及MPT64編碼基因的錶達水平,探討結覈分枝桿菌耐藥菌株和敏感株,北京基因型和非北京基因型的蛋白抗原在轉錄水平的差異性及qRT-PCR診斷活菌的價值.方法 根據Genbank提供的序列,設計目的 基因fbpB、psts1、mpt64及內參基因Sigа的特異性引物,將擴增片段剋隆入載體pMD18-T simple,重組質粒經純化及倍比稀釋,應用SYBR GreenⅠ熒光染料建立檢測fbpB、psts1、mpt64基因錶達水平的實時定量PCR方法.選用46株結覈分枝桿菌臨床分離株,以及2株非結覈分枝桿菌.應用qRT-PCR檢測上述菌株、H37Rv國際標準株fbpB、psts1、mpt64基因的錶達水平.結果 結覈分枝桿菌活菌的擴增結果呈典型的S型麯線,而結覈分枝桿菌死菌和非結覈分枝桿菌呈水平直線,沒有檢測到熒光信號;耐藥組中的mpt64基因錶達水平低于敏感組及H37Rv標準株,有統計學意義(t=3.093,P＜0.01;t=2.545,P＜0.05),北京基因型組中的psts1基因錶達水平低于非北京基因型組及H37Rv標準株.結論 有統計學意義(t=2.567,P＜0.05;t=2.373,P＜0.05).結論 成功建立瞭fbpB、psts1、mpt64基因的qRT-PCR檢測方法,該方法可以快速判斷活菌與死菌.檢測髮現耐藥組中的mpt64基因錶達水平低于敏感組及H37Rv標準株;北京基因型組中的psts1基因錶達水平低于非北京基因型組及H37Rv標準株.
목적 운용실시정량PCR(quantitative real-time,qRT-PCR)검측결핵분지간균단백 Ag85B、38kDa급MPT64편마기인적표체수평,탐토결핵분지간균내약균주화민감주,북경기인형화비북경기인형적단백항원재전록수평적차이성급qRT-PCR진단활균적개치.방법 근거Genbank제공적서렬,설계목적 기인fbpB、psts1、mpt64급내삼기인Sigа적특이성인물,장확증편단극륭입재체pMD18-T simple,중조질립경순화급배비희석,응용SYBR GreenⅠ형광염료건립검측fbpB、psts1、mpt64기인표체수평적실시정량PCR방법.선용46주결핵분지간균림상분리주,이급2주비결핵분지간균.응용qRT-PCR검측상술균주、H37Rv국제표준주fbpB、psts1、mpt64기인적표체수평.결과 결핵분지간균활균적확증결과정전형적S형곡선,이결핵분지간균사균화비결핵분지간균정수평직선,몰유검측도형광신호;내약조중적mpt64기인표체수평저우민감조급H37Rv표준주,유통계학의의(t=3.093,P＜0.01;t=2.545,P＜0.05),북경기인형조중적psts1기인표체수평저우비북경기인형조급H37Rv표준주.결론 유통계학의의(t=2.567,P＜0.05;t=2.373,P＜0.05).결론 성공건립료fbpB、psts1、mpt64기인적qRT-PCR검측방법,해방법가이쾌속판단활균여사균.검측발현내약조중적mpt64기인표체수평저우민감조급H37Rv표준주;북경기인형조중적psts1기인표체수평저우비북경기인형조급H37Rv표준주.
