CAJ | 학술논문

目的:采用活细胞成像技术,观察血系单核细胞诱导形成破骨细胞的全过程,旨在进一步阐明破骨细胞血系起源的发生及其细胞动力学.方法:取成年SPF级纯种雄性SD大鼠1只,体重280 g,腹主动脉采血8ml,经密度梯度离心分离单个核细胞,在RANKL与M-CSF诱导下,分为例置相差显微镜观察组、抗酒石酸酸性磷酸酶染色组、噬骨试验扫描电镜观察组、活细胞成像组4组进行培养.倒置相差显微镜观察组从培养开始,在数字显微成像系统下,每天观察记录1次；抗酒石酸酸性磷酸酶染色组培养21 d作酶活性染色鉴定；噬骨试验扫描电镜观察组培养21d取出骨磨片作扫描电镜观察；活细胞成像组采用多点位缩时电影法对整个培养过程进行长达35 d的连续观察记录.结果:诱导培养2周后,倒置相差显微镜观察可见大量多核细胞形成,外形呈圆形、梭形、扇形、椭圆形及不规则突起状；抗酒石酸酸性磷酸酶染色绝大部分多棱细胞与单核细胞均呈阳性反应；骨磨片扫描电镜观察可见较多骨吸收陷窝、坑洼及沟道,还有位于陷窝及沟道内正在行使骨吸收功能的破骨细胞；活细胞成像观察到起源于周围血的多核破骨细胞是由单核细胞、单核细胞与多核细胞及多核细胞之间相互融合而成,其细胞间的融合均发生在贴壁状态,显微缩时电影观察显示破骨细胞形态表现复杂多变.结论:大鼠周围血单核细胞在RANKL和M-CSF诱导下,可以向破骨细胞分化,形成具有骨吸收功能的多棱破骨细胞.破骨细胞的形成是发生在贴壁状态下多种形式的细胞融合过程,破骨细胞的粘附特性对其存活及功能发挥至关重要.破骨细胞具有吞噬功能,其形态结构动态多变.破骨细胞不仅是一种多核细胞,还可能包括单核破骨细胞.破骨细胞通过融合形成多棱巨细胞的特性,可能是其适应功能需求与骨吸收效率的一种特殊生物学行为.实验结果进一步证实了破骨细胞的血系起源学说,并为深入阐明破骨细胞的细胞动力学与细胞生物学特性提供了新的实验研究依据. 目的:採用活細胞成像技術,觀察血繫單覈細胞誘導形成破骨細胞的全過程,旨在進一步闡明破骨細胞血繫起源的髮生及其細胞動力學.方法:取成年SPF級純種雄性SD大鼠1隻,體重280 g,腹主動脈採血8ml,經密度梯度離心分離單箇覈細胞,在RANKL與M-CSF誘導下,分為例置相差顯微鏡觀察組、抗酒石痠痠性燐痠酶染色組、噬骨試驗掃描電鏡觀察組、活細胞成像組4組進行培養.倒置相差顯微鏡觀察組從培養開始,在數字顯微成像繫統下,每天觀察記錄1次；抗酒石痠痠性燐痠酶染色組培養21 d作酶活性染色鑒定；噬骨試驗掃描電鏡觀察組培養21d取齣骨磨片作掃描電鏡觀察；活細胞成像組採用多點位縮時電影法對整箇培養過程進行長達35 d的連續觀察記錄.結果:誘導培養2週後,倒置相差顯微鏡觀察可見大量多覈細胞形成,外形呈圓形、梭形、扇形、橢圓形及不規則突起狀；抗酒石痠痠性燐痠酶染色絕大部分多稜細胞與單覈細胞均呈暘性反應；骨磨片掃描電鏡觀察可見較多骨吸收陷窩、坑窪及溝道,還有位于陷窩及溝道內正在行使骨吸收功能的破骨細胞；活細胞成像觀察到起源于週圍血的多覈破骨細胞是由單覈細胞、單覈細胞與多覈細胞及多覈細胞之間相互融閤而成,其細胞間的融閤均髮生在貼壁狀態,顯微縮時電影觀察顯示破骨細胞形態錶現複雜多變.結論:大鼠週圍血單覈細胞在RANKL和M-CSF誘導下,可以嚮破骨細胞分化,形成具有骨吸收功能的多稜破骨細胞.破骨細胞的形成是髮生在貼壁狀態下多種形式的細胞融閤過程,破骨細胞的粘附特性對其存活及功能髮揮至關重要.破骨細胞具有吞噬功能,其形態結構動態多變.破骨細胞不僅是一種多覈細胞,還可能包括單覈破骨細胞.破骨細胞通過融閤形成多稜巨細胞的特性,可能是其適應功能需求與骨吸收效率的一種特殊生物學行為.實驗結果進一步證實瞭破骨細胞的血繫起源學說,併為深入闡明破骨細胞的細胞動力學與細胞生物學特性提供瞭新的實驗研究依據.
목적:채용활세포성상기술,관찰혈계단핵세포유도형성파골세포적전과정,지재진일보천명파골세포혈계기원적발생급기세포동역학.방법:취성년SPF급순충웅성SD대서1지,체중280 g,복주동맥채혈8ml,경밀도제도리심분리단개핵세포,재RANKL여M-CSF유도하,분위례치상차현미경관찰조、항주석산산성린산매염색조、서골시험소묘전경관찰조、활세포성상조4조진행배양.도치상차현미경관찰조종배양개시,재수자현미성상계통하,매천관찰기록1차；항주석산산성린산매염색조배양21 d작매활성염색감정；서골시험소묘전경관찰조배양21d취출골마편작소묘전경관찰；활세포성상조채용다점위축시전영법대정개배양과정진행장체35 d적련속관찰기록.결과:유도배양2주후,도치상차현미경관찰가견대량다핵세포형성,외형정원형、사형、선형、타원형급불규칙돌기상；항주석산산성린산매염색절대부분다릉세포여단핵세포균정양성반응；골마편소묘전경관찰가견교다골흡수함와、갱와급구도,환유위우함와급구도내정재행사골흡수공능적파골세포；활세포성상관찰도기원우주위혈적다핵파골세포시유단핵세포、단핵세포여다핵세포급다핵세포지간상호융합이성,기세포간적융합균발생재첩벽상태,현미축시전영관찰현시파골세포형태표현복잡다변.결론:대서주위혈단핵세포재RANKL화M-CSF유도하,가이향파골세포분화,형성구유골흡수공능적다릉파골세포.파골세포적형성시발생재첩벽상태하다충형식적세포융합과정,파골세포적점부특성대기존활급공능발휘지관중요.파골세포구유탄서공능,기형태결구동태다변.파골세포불부시일충다핵세포,환가능포괄단핵파골세포.파골세포통과융합형성다릉거세포적특성,가능시기괄응공능수구여골흡수효솔적일충특수생물학행위.실험결과진일보증실료파골세포적혈계기원학설,병위심입천명파골세포적세포동역학여세포생물학특성제공료신적실험연구의거.