中华流行病学杂志
中華流行病學雜誌
중화류행병학잡지
CHINESE JOURNAL OF EPIDEMIOLOGY
2007年
10期
1016-1020
,共5页
梅毒螺旋体%基因%重组表达%酶联免疫吸附试验
梅毒螺鏇體%基因%重組錶達%酶聯免疫吸附試驗
매독라선체%기인%중조표체%매련면역흡부시험
目的 构建梅毒螺旋体tpn17、tpn47基因及tpn17-tpn47融合基因原核表达系统,建立基于rTpN17、rTpN47和rTpN17-TpN47的ELISAs并对其用于梅毒血清学诊断的敏感性和特异性进行评价.方法 采用常规分子生物学方法扩增并克隆梅毒螺旋体tpn17和tpn47基因,以连接引物PCR构建tpn17-tpn47人工融合基因,建立上述目的 基因原核表达系统.采用SDS-PAGE检测目的 重组蛋白rTpN17、rTpN47和rTpN17-TpN47表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯上述目的 重组蛋白,Western blot检测其免疫性.分别以rTpN17、rTpN47和rTpN17-TpN47为包被抗原,建立相应ELISAs检测健康人群、类风湿关节炎(RA)和系统性红斑狼疮(SLE)患者及梅毒患者血清标本中梅毒抗体并与现行TRUST和TPHA进行比较.结果 克隆的tpn17、tpn47基因及构建的tpn17-tpn47融合基因与GenBank中相关序列相似性为100%.rTpN17、rTpN47和rTpN17-TpN47表达量分别为细菌总蛋白的37.2%、23.3%和29.8%,其提纯物电泳后均显示单一条带,并均能与梅毒抗体阳性血清发生明显的结合反应.rTpN17-ELISA、rTpN47-ELISA和rTpN17-TpN47-ELISA对所有健康人血清、RA和SLE患者血清标本的检测结果均为阴性,对梅毒患者血清标本检测阳性率分别为84.4%、82.3%和98.1%,其中rTpN17-ELISA和rTpN47-ELISA检测阳性率低于TPHA(P＜0.01),rTpN17-TpN47-ELISA检测阳性率相似(P＞0.05),但均高于TRUST(71.4%).结论 研究中建立的rTpN17-ELISA、rTpN47-ELISA,尤其是rTpN17-TpN47-ELISA,有望成为快速、简便、安全的梅毒患者血清学筛查方法.
目的 構建梅毒螺鏇體tpn17、tpn47基因及tpn17-tpn47融閤基因原覈錶達繫統,建立基于rTpN17、rTpN47和rTpN17-TpN47的ELISAs併對其用于梅毒血清學診斷的敏感性和特異性進行評價.方法 採用常規分子生物學方法擴增併剋隆梅毒螺鏇體tpn17和tpn47基因,以連接引物PCR構建tpn17-tpn47人工融閤基因,建立上述目的 基因原覈錶達繫統.採用SDS-PAGE檢測目的 重組蛋白rTpN17、rTpN47和rTpN17-TpN47錶達情況,Ni-NTA親和層析法提純上述目的 重組蛋白,Western blot檢測其免疫性.分彆以rTpN17、rTpN47和rTpN17-TpN47為包被抗原,建立相應ELISAs檢測健康人群、類風濕關節炎(RA)和繫統性紅斑狼瘡(SLE)患者及梅毒患者血清標本中梅毒抗體併與現行TRUST和TPHA進行比較.結果 剋隆的tpn17、tpn47基因及構建的tpn17-tpn47融閤基因與GenBank中相關序列相似性為100%.rTpN17、rTpN47和rTpN17-TpN47錶達量分彆為細菌總蛋白的37.2%、23.3%和29.8%,其提純物電泳後均顯示單一條帶,併均能與梅毒抗體暘性血清髮生明顯的結閤反應.rTpN17-ELISA、rTpN47-ELISA和rTpN17-TpN47-ELISA對所有健康人血清、RA和SLE患者血清標本的檢測結果均為陰性,對梅毒患者血清標本檢測暘性率分彆為84.4%、82.3%和98.1%,其中rTpN17-ELISA和rTpN47-ELISA檢測暘性率低于TPHA(P＜0.01),rTpN17-TpN47-ELISA檢測暘性率相似(P＞0.05),但均高于TRUST(71.4%).結論 研究中建立的rTpN17-ELISA、rTpN47-ELISA,尤其是rTpN17-TpN47-ELISA,有望成為快速、簡便、安全的梅毒患者血清學篩查方法.
목적 구건매독라선체tpn17、tpn47기인급tpn17-tpn47융합기인원핵표체계통,건립기우rTpN17、rTpN47화rTpN17-TpN47적ELISAs병대기용우매독혈청학진단적민감성화특이성진행평개.방법 채용상규분자생물학방법확증병극륭매독라선체tpn17화tpn47기인,이련접인물PCR구건tpn17-tpn47인공융합기인,건립상술목적 기인원핵표체계통.채용SDS-PAGE검측목적 중조단백rTpN17、rTpN47화rTpN17-TpN47표체정황,Ni-NTA친화층석법제순상술목적 중조단백,Western blot검측기면역성.분별이rTpN17、rTpN47화rTpN17-TpN47위포피항원,건립상응ELISAs검측건강인군、류풍습관절염(RA)화계통성홍반랑창(SLE)환자급매독환자혈청표본중매독항체병여현행TRUST화TPHA진행비교.결과 극륭적tpn17、tpn47기인급구건적tpn17-tpn47융합기인여GenBank중상관서렬상사성위100%.rTpN17、rTpN47화rTpN17-TpN47표체량분별위세균총단백적37.2%、23.3%화29.8%,기제순물전영후균현시단일조대,병균능여매독항체양성혈청발생명현적결합반응.rTpN17-ELISA、rTpN47-ELISA화rTpN17-TpN47-ELISA대소유건강인혈청、RA화SLE환자혈청표본적검측결과균위음성,대매독환자혈청표본검측양성솔분별위84.4%、82.3%화98.1%,기중rTpN17-ELISA화rTpN47-ELISA검측양성솔저우TPHA(P＜0.01),rTpN17-TpN47-ELISA검측양성솔상사(P＞0.05),단균고우TRUST(71.4%).결론 연구중건립적rTpN17-ELISA、rTpN47-ELISA,우기시rTpN17-TpN47-ELISA,유망성위쾌속、간편、안전적매독환자혈청학사사방법.
