CAJ | 학술논문

目的建立耐高三尖杉酯碱人SKM-1细胞系,初步探讨该细胞系的生物学特性及多药耐药机制.方法通过较大剂量间断冲击逐渐增加药物浓度的方法培养人骨髓增生异常综合征转急性髓系白血病细胞系SKM-1细胞,建立耐高三尖杉酯碱的SKM-1细胞系,命名为SKM-1/HHT.光学显微镜下观察耐药细胞系和亲本细胞系的一般形态学变化,MTT法测定倍增时间和耐药指数,绘制生长曲线;利用流式细胞术检测细胞周期分布及细胞内柔红霉素含量;应用常规遗传学方法进行核型分析;采用荧光相对实时定量PCR方法检测多药耐药相关基因(mdr1及MRP)及topo-Ⅱa的表达.结果历经7个月建立了耐药细胞系SKM-1/HHT.耐药细胞与亲本细胞的形态及免疫表型接近;耐药细胞核型与SKM-1细胞基本相同,但更为复杂,存在20、X、4、5、9、11号染色体差异;耐药细胞G1期细胞增多(64.04%对41.91%),S期细胞减少(34.92% 对53.53%),G2期细胞减少(1.04%对4.56%);耐药细胞对高三尖杉酯碱、长春新碱、柔红霉素、依托泊苷耐药性明显增加,耐药指数分别为17.94、8.75、5.99和13.76;耐药细胞内DNR荧光量明显低于亲本细胞(698±36 对858±54);耐药细胞mdr1表达水平明显增高,其2-ΔCt值为亲本细胞的20.1倍[(3.42±0.46)×10-2对(0.17±0.01)×10-2,P<0.05];MRP表达亦明显升高,2-ΔCt值为亲本细胞的3.56倍[(4.77±0.87)×10-3 对(1.34±0.56)×10-3,P<0.05];topo-Ⅱa基因表达在耐药细胞有所下降,耐药细胞与亲本细胞的2-ΔCt值之比为 0.619∶1[(1.91±0.30)×10-4对(3.08±0.21)×10-4,P<0.05].结论建立了对高三尖杉酯碱耐药的SKM-1/HHT细胞系,其耐药机制主要涉及mdr1的过度表达而导致的细胞外排增强,MRP及topo-Ⅱa表达水平的改变可能也部分参与了这一过程.
목적 건립내고삼첨삼지감인SKM-1세포계,초보탐토해세포계적생물학특성급다약내약궤제.방법 통과교대제량간단충격축점증가약물농도적방법배양인골수증생이상종합정전급성수계백혈병세포계SKM-1세포,건립내고삼첨삼지감적SKM-1세포계,명명위SKM-1/HHT.광학현미경하관찰내약세포계화친본세포계적일반형태학변화,MTT법측정배증시간화내약지수,회제생장곡선;이용류식세포술검측세포주기분포급세포내유홍매소함량;응용상규유전학방법진행핵형분석;채용형광상대실시정량PCR방법검측다약내약상관기인(mdr1급MRP)급topo-Ⅱa적표체.결과 력경7개월건립료내약세포계SKM-1/HHT.내약세포여친본세포적형태급면역표형접근;내약세포핵형여SKM-1세포기본상동,단경위복잡,존재20、X、4、5、9、11호염색체차이;내약세포G1기세포증다(64.04%대41.91%),S기세포감소(34.92% 대53.53%),G2기세포감소(1.04%대4.56%);내약세포대고삼첨삼지감、장춘신감、유홍매소、의탁박감내약성명현증가,내약지수분별위17.94、8.75、5.99화13.76;내약세포내DNR형광량명현저우친본세포(698±36 대858±54);내약세포mdr1표체수평명현증고,기2-ΔCt치위친본세포적20.1배[(3.42±0.46)×10-2대(0.17±0.01)×10-2,P<0.05];MRP표체역명현승고,2-ΔCt치위친본세포적3.56배[(4.77±0.87)×10-3 대(1.34±0.56)×10-3,P<0.05];topo-Ⅱa기인표체재내약세포유소하강,내약세포여친본세포적2-ΔCt치지비위 0.619∶1[(1.91±0.30)×10-4대(3.08±0.21)×10-4,P<0.05].결론 건립료대고삼첨삼지감내약적SKM-1/HHT세포계,기내약궤제주요섭급mdr1적과도표체이도치적세포외배증강,MRP급topo-Ⅱa표체수평적개변가능야부분삼여료저일과정.