西安医科大学学报
西安醫科大學學報
서안의과대학학보
JOURNAL OF XI'AN MEDICAL UNIVERSITY
2002年
3期
246-248,261
,共4页
刘莉扬%马文丽%宋艳斌%张宝%郑文岭
劉莉颺%馬文麗%宋豔斌%張寶%鄭文嶺
류리양%마문려%송염빈%장보%정문령
RD-PCR%酿酒酵母%EST
RD-PCR%釀酒酵母%EST
RD-PCR%양주효모%EST
目的应用RD-PCR技术分离酵母基因.方法首先提取酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)总RNA,纯化mRNA;然后,反转录成双链cDNA;再用限制性内切酶Sau3AI酶切,在酶切片段上加上接头后,用通用引物U进行第一次PCR扩增,以这一产物为模板用选择性引物(在通用引物的3'端延伸两个碱基)作第二次PCR扩增.5%PAGE胶分离基因片段,选择单带割胶回收,做第三次PCR扩增,与载体连接,最后进行测序分析.结果采用这种方法分离得到的基因片段,经Blast检索分析,确为来自酿酒酵母基因的cDNA片段或表达序列标签(EST).结论 RD-PCR技术可以有效地分离EST,可用于酵母基因表达调控的研究.
目的應用RD-PCR技術分離酵母基因.方法首先提取釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)總RNA,純化mRNA;然後,反轉錄成雙鏈cDNA;再用限製性內切酶Sau3AI酶切,在酶切片段上加上接頭後,用通用引物U進行第一次PCR擴增,以這一產物為模闆用選擇性引物(在通用引物的3'耑延伸兩箇堿基)作第二次PCR擴增.5%PAGE膠分離基因片段,選擇單帶割膠迴收,做第三次PCR擴增,與載體連接,最後進行測序分析.結果採用這種方法分離得到的基因片段,經Blast檢索分析,確為來自釀酒酵母基因的cDNA片段或錶達序列標籤(EST).結論 RD-PCR技術可以有效地分離EST,可用于酵母基因錶達調控的研究.
목적응용RD-PCR기술분리효모기인.방법수선제취양주효모(Saccharomyces cerevisiae)총RNA,순화mRNA;연후,반전록성쌍련cDNA;재용한제성내절매Sau3AI매절,재매절편단상가상접두후,용통용인물U진행제일차PCR확증,이저일산물위모판용선택성인물(재통용인물적3'단연신량개감기)작제이차PCR확증.5%PAGE효분리기인편단,선택단대할효회수,주제삼차PCR확증,여재체련접,최후진행측서분석.결과채용저충방법분리득도적기인편단,경Blast검색분석,학위래자양주효모기인적cDNA편단혹표체서렬표첨(EST).결론 RD-PCR기술가이유효지분리EST,가용우효모기인표체조공적연구.
