生命科学研究
生命科學研究
생명과학연구
LIFE SCIENCE RESEARCH
2004年
1期
32-35
,共4页
王慧%荫俊%侯晓军%邢洪光
王慧%蔭俊%侯曉軍%邢洪光
왕혜%음준%후효군%형홍광
破伤风毒素%保护性抗原%基因表达%毕氏酵母
破傷風毒素%保護性抗原%基因錶達%畢氏酵母
파상풍독소%보호성항원%기인표체%필씨효모
采用PCR方法,从C.Tetani 64008菌株中扩增大小为1 353 bp的破伤风毒素与靶细胞起结合作用的重链C端基因(Tetc),直接连接pGEM-T 载体进行测序,并以pPIC9K为表达载体构建重组表达质粒,经线形化的重组质粒电转化毕氏酵母细胞GS115和KM71,甲醇诱导获得了分泌表达,表达产物存在于培养上清中,占分泌蛋白的10%.通过免疫印迹可以检测到重组表达产物.活性测定表明,重组蛋白具特异结合活性.本研究通过实现破伤风毒素保护性抗原在酵母系统中的分泌表达,研究其影响因素,为其它细菌毒素蛋白高效可溶性表达,及进一步抗原片段介导保护性免疫研究及抗毒素制备奠定了基础.
採用PCR方法,從C.Tetani 64008菌株中擴增大小為1 353 bp的破傷風毒素與靶細胞起結閤作用的重鏈C耑基因(Tetc),直接連接pGEM-T 載體進行測序,併以pPIC9K為錶達載體構建重組錶達質粒,經線形化的重組質粒電轉化畢氏酵母細胞GS115和KM71,甲醇誘導穫得瞭分泌錶達,錶達產物存在于培養上清中,佔分泌蛋白的10%.通過免疫印跡可以檢測到重組錶達產物.活性測定錶明,重組蛋白具特異結閤活性.本研究通過實現破傷風毒素保護性抗原在酵母繫統中的分泌錶達,研究其影響因素,為其它細菌毒素蛋白高效可溶性錶達,及進一步抗原片段介導保護性免疫研究及抗毒素製備奠定瞭基礎.
채용PCR방법,종C.Tetani 64008균주중확증대소위1 353 bp적파상풍독소여파세포기결합작용적중련C단기인(Tetc),직접련접pGEM-T 재체진행측서,병이pPIC9K위표체재체구건중조표체질립,경선형화적중조질립전전화필씨효모세포GS115화KM71,갑순유도획득료분비표체,표체산물존재우배양상청중,점분비단백적10%.통과면역인적가이검측도중조표체산물.활성측정표명,중조단백구특이결합활성.본연구통과실현파상풍독소보호성항원재효모계통중적분비표체,연구기영향인소,위기타세균독소단백고효가용성표체,급진일보항원편단개도보호성면역연구급항독소제비전정료기출.
