pcDNA3-TIMP-2的构建与表达
pcDNA3-TIMP-2적구건여표체
The construction and expression in vitro of pcDAN3-TIMP-2
  • 万方数据
    上海第二医科大学学报 상해제이의과대학학보
    ACTA UNIVERSITATIS MEDICINALIS SECONDAE SHANGHAI
    2004年 6期 413-416,420 ,共5页

    王长谦%王顺%汤大鸣%林旭%丁弘毅%谢秀兰%徐依敏%王彬尧%黄定九

    왕장겸%왕순%탕대명%림욱%정홍의%사수란%서의민%왕빈요%황정구

    组织金属蛋白酶活性抑制物%基因克隆%基因转染 組織金屬蛋白酶活性抑製物%基因剋隆%基因轉染
    조직금속단백매활성억제물%기인극륭%기인전염
    目的构建TIMP-2基因的真核表达载体pcDNA3-TIMP-2,并探讨其体外表达效果.方法应用已克隆得到的人TIMP-2基因和分子克隆技术构建pcDNA3-TIMP -2,酶切鉴定,并用体外培养人THP-1细胞,电穿孔转入pcDNA3-TIMP-2,RT PCR和Western blotting分别检测外源基因转染效果,Zymography检测培养上清MMPs活性.结果构建pcDNA3-TIMP-2经酶切和测序鉴定正确,电穿孔法导入体外培养人THP 1细胞后,TIMP-2 mRNA约增加2.8倍,TIMP 2 蛋白表达增加约2.7倍,MMP-2和MMP-9的活性分别约为对照组的32%和28%.结论成功构建了pcDNA3-TIMP-2,且证实有良好的体外转染和表达效果,为进行转移TIMPs基因抑制MMPs及探讨其与动脉粥样硬化等多种病理过程的关系奠定基础.
    목적구건TIMP-2기인적진핵표체재체pcDNA3-TIMP-2,병탐토기체외표체효과.방법응용이극륭득도적인TIMP-2기인화분자극륭기술구건pcDNA3-TIMP -2,매절감정,병용체외배양인THP-1세포,전천공전입pcDNA3-TIMP-2,RT PCR화Western blotting분별검측외원기인전염효과,Zymography검측배양상청MMPs활성.결과구건pcDNA3-TIMP-2경매절화측서감정정학,전천공법도입체외배양인THP 1세포후,TIMP-2 mRNA약증가2.8배,TIMP 2 단백표체증가약2.7배,MMP-2화MMP-9적활성분별약위대조조적32%화28%.결론성공구건료pcDNA3-TIMP-2,차증실유량호적체외전염화표체효과,위진행전이TIMPs기인억제MMPs급탐토기여동맥죽양경화등다충병리과정적관계전정기출.
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