安徽农业大学学报
安徽農業大學學報
안휘농업대학학보
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL UNIVERSITY
2005年
3期
316-322
,共7页
曾永辉%陈喜涵%苗丽霞%曹军卫
曾永輝%陳喜涵%苗麗霞%曹軍衛
증영휘%진희함%묘려하%조군위
拟南芥%转基因%枯草芽孢杆菌%proBA基因%pBI121%耐盐
擬南芥%轉基因%枯草芽孢桿菌%proBA基因%pBI121%耐鹽
의남개%전기인%고초아포간균%proBA기인%pBI121%내염
从枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)抗脯氨酸结构类似物突变株中克隆得到脯氨酸合成途径中的关键酶基因proB(编码γ-谷氨酰胺激酶)和proA(编码谷氨酰胺-γ-半醛脱氢酶),同时设计引物从拟南芥基因组中扩增得到吡咯啉-5-羧酸合成酶B基因(p5csB)的第一个内含子序列,将其分别与proB和proA基因通过PCR拼接后,酶切连接构建得到植物双元表达载体pBI121pro.以LBA4404为介导,采用真空抽滤的方法转化得到转proBA基因拟南芥;第三代的纯合子(T3)通过半巢式PCR的方法验证外源基因已整合到拟南芥基因组中,GUS活性分析表明外源基因在叶片中表达最强,茎部其次,根部最弱;对600 mmol·L-1致死浓度NaCl耐受能力的分析表明,转基因拟南芥的平均存活时间(37.8 min)明显高于野生型拟南芥(26 min).
從枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)抗脯氨痠結構類似物突變株中剋隆得到脯氨痠閤成途徑中的關鍵酶基因proB(編碼γ-穀氨酰胺激酶)和proA(編碼穀氨酰胺-γ-半醛脫氫酶),同時設計引物從擬南芥基因組中擴增得到吡咯啉-5-羧痠閤成酶B基因(p5csB)的第一箇內含子序列,將其分彆與proB和proA基因通過PCR拼接後,酶切連接構建得到植物雙元錶達載體pBI121pro.以LBA4404為介導,採用真空抽濾的方法轉化得到轉proBA基因擬南芥;第三代的純閤子(T3)通過半巢式PCR的方法驗證外源基因已整閤到擬南芥基因組中,GUS活性分析錶明外源基因在葉片中錶達最彊,莖部其次,根部最弱;對600 mmol·L-1緻死濃度NaCl耐受能力的分析錶明,轉基因擬南芥的平均存活時間(37.8 min)明顯高于野生型擬南芥(26 min).
종고초아포간균(Bacillus subtilis)항포안산결구유사물돌변주중극륭득도포안산합성도경중적관건매기인proB(편마γ-곡안선알격매)화proA(편마곡안선알-γ-반철탈경매),동시설계인물종의남개기인조중확증득도필각람-5-최산합성매B기인(p5csB)적제일개내함자서렬,장기분별여proB화proA기인통과PCR병접후,매절련접구건득도식물쌍원표체재체pBI121pro.이LBA4404위개도,채용진공추려적방법전화득도전proBA기인의남개;제삼대적순합자(T3)통과반소식PCR적방법험증외원기인이정합도의남개기인조중,GUS활성분석표명외원기인재협편중표체최강,경부기차,근부최약;대600 mmol·L-1치사농도NaCl내수능력적분석표명,전기인의남개적평균존활시간(37.8 min)명현고우야생형의남개(26 min).
