CAJ | 학술논문

目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在神经生长因子(NGF)作用下大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞生存及NGF撤除后细胞凋亡的过程中的作用及机制.方法:SHP-2抑制剂NSC87877作用于PC12细胞,MTT测定PC12细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率.将plRES-GFP空载体、pIRES-GFP-SHP-2野生型和pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体通过脂质体方法转染PC12细胞;加入NGF作用1h和撤除NGF 5 h后分别用Western blotting方法检测细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化ERK(P-ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)及磷酸化JNK(P-JNK)表达变化.结果:MTT和流式细胞仪检测表明SHP-2可以促进PC12细胞生存,抑制细胞凋亡.Western blotting结果显示无SHP-2抑制剂组和转染plRES-SHP-2野生型组P-ERK表达在加入NGF的过程中升高;撤除NGF后,各组P-ERK表达均降低,pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体组和plRES-GFP组P-ERK表达明显低于plRES-GFP-SHP-2野生型组,NGF去除+SHP-2抑制剂组的表达水平明显低于NGF去除对照组;NGF去除+SHP-2抑制剂组P-JNK表达高于NGF去除对照组;plRES-GFP-SHP-2C459S突变体组高于pIRES-GFP空载体组,plRES-GFP-SHP-2野生型组低于plRES-GFP空载体组.结论:SHP-2可能通过对ERK的正向激活,抑制JNK的激活,增强NGF作用下PC12细胞生存及抑制NGF撤除后所致细胞凋亡,从而在NGF的信号转导中起到一个中心环节的作用.
목적:탐토단백락안산린산매SHP-2재신경생장인자(NGF)작용하대서기락세포류PC12세포생존급NGF철제후세포조망적과정중적작용급궤제.방법:SHP-2억제제NSC87877작용우PC12세포,MTT측정PC12세포존활솔;류식세포의검측세포조망솔.장plRES-GFP공재체、pIRES-GFP-SHP-2야생형화pIRES-GFP-SHP-2C459S돌변체통과지질체방법전염PC12세포;가입NGF작용1h화철제NGF 5 h후분별용Western blotting방법검측세포외신호조절단백격매(ERK)、린산화ERK(P-ERK)、c-Jun안기말단격매(JNK)급린산화JNK(P-JNK)표체변화.결과:MTT화류식세포의검측표명SHP-2가이촉진PC12세포생존,억제세포조망.Western blotting결과현시무SHP-2억제제조화전염plRES-SHP-2야생형조P-ERK표체재가입NGF적과정중승고;철제NGF후,각조P-ERK표체균강저,pIRES-GFP-SHP-2C459S돌변체조화plRES-GFP조P-ERK표체명현저우plRES-GFP-SHP-2야생형조,NGF거제+SHP-2억제제조적표체수평명현저우NGF거제대조조;NGF거제+SHP-2억제제조P-JNK표체고우NGF거제대조조;plRES-GFP-SHP-2C459S돌변체조고우pIRES-GFP공재체조,plRES-GFP-SHP-2야생형조저우plRES-GFP공재체조.결론:SHP-2가능통과대ERK적정향격활,억제JNK적격활,증강NGF작용하PC12세포생존급억제NGF철제후소치세포조망,종이재NGF적신호전도중기도일개중심배절적작용.