河南师范大学学报（自然科学版）
河南師範大學學報（自然科學版）
하남사범대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF HENAN NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2011年
3期
111-114,166
,共5页
梁俊波%程筱雯%缪时英%王琳芳
樑俊波%程篠雯%繆時英%王琳芳
량준파%정소문%무시영%왕림방
RNF138%基因克隆%蛋白表达纯化%Western Blot
RNF138%基因剋隆%蛋白錶達純化%Western Blot
RNF138%기인극륭%단백표체순화%Western Blot
目的:制备RNF138的多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定基础.方法:通过RT-PCR从小鼠睾丸cDNA文库中扩增mRNF138的开放阅读框,并克隆至原核表达载体pET-30a中;将测序正确的pET-30a(+)/mRNF138重组质粒转化大肠杆菌Rosseta菌株,经IPTG诱导表达后通过镍离子螯合柱(Ni-NTA)亲和纯化得到重组的mRNF138蛋白;用纯化的mRNF138蛋白免疫新西兰大白兔得到多克隆抗体.结果:ELISA检测结果显示,制备抗体的滴度达到1:32万;Western Blot实验结果显示,所制备抗体不仅能识别原核表达的融合蛋白,也可以有效识别小鼠源的RNF138蛋白.
目的:製備RNF138的多剋隆抗體,為進一步研究其功能奠定基礎.方法:通過RT-PCR從小鼠睪汍cDNA文庫中擴增mRNF138的開放閱讀框,併剋隆至原覈錶達載體pET-30a中;將測序正確的pET-30a(+)/mRNF138重組質粒轉化大腸桿菌Rosseta菌株,經IPTG誘導錶達後通過鎳離子螯閤柱(Ni-NTA)親和純化得到重組的mRNF138蛋白;用純化的mRNF138蛋白免疫新西蘭大白兔得到多剋隆抗體.結果:ELISA檢測結果顯示,製備抗體的滴度達到1:32萬;Western Blot實驗結果顯示,所製備抗體不僅能識彆原覈錶達的融閤蛋白,也可以有效識彆小鼠源的RNF138蛋白.
목적:제비RNF138적다극륭항체,위진일보연구기공능전정기출.방법:통과RT-PCR종소서고환cDNA문고중확증mRNF138적개방열독광,병극륭지원핵표체재체pET-30a중;장측서정학적pET-30a(+)/mRNF138중조질립전화대장간균Rosseta균주,경IPTG유도표체후통과얼리자오합주(Ni-NTA)친화순화득도중조적mRNF138단백;용순화적mRNF138단백면역신서란대백토득도다극륭항체.결과:ELISA검측결과현시,제비항체적적도체도1:32만;Western Blot실험결과현시,소제비항체불부능식별원핵표체적융합단백,야가이유효식별소서원적RNF138단백.
