CAJ | 학술논문

目的:从成年雄性豚鼠脂肪中分离培养脂肪干细胞,为脂肪干细胞移植治疗感音神经性耳聋的实验研究创造条件.方法:实验于2005-12/2006-03在河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室完成.成年雄性豚鼠,体质量500～750 g.分离培养豚鼠脂肪组织,培养三四天后首次换液.倒置显微镜下观察有大量细胞贴壁和漂浮的血细胞,用磷酸缓冲液反复冲洗去除漂浮的细胞,加入DMEM基础培养基+10%胎牛血清培养液.传代前用少量磷酸缓冲液洗涤1次,加入0.25%胰蛋白酶和0.02%乙二胺四乙酸2 mL,见大部分细胞胞质回缩、形态变圆,加入2 mL含血清的DMEM培养液终止消化,收集细胞悬液、计数,以2×104/cm2细胞密度接种于新的培养皿内.二三天达到融合状态,继续传代培养.四甲基偶氮唑蓝测定第1、3、10代脂肪干细胞生长曲线,流式细胞仪检测脂肪干细胞表面标志.结果:①原代培养显示培养的脂肪间充质干细胞2 d左右开始贴壁,7 d左右可达90%融合,基本上为梭形成纤维样细胞形态.②生长曲线显示,豚鼠脂肪干细胞在1～3代增值能力较强,以第1代细胞最强,10代以后增殖能力减弱,细胞生长进入平台期.经消化传代后的第1、3、10代细胞均经历24～48 h的潜伏期,此后为3～5 d对数生长期,逐渐进入生长平台期.14代以前具有活跃的增殖能力.③脂肪干细胞标志CD105,CD44呈阳性表达,而造血干细胞标志GD34阴性表达.结论:成功地建立了一种分离培养豚鼠脂肪间充质干细胞的方法,其生长稳定、增殖较快,可作为干细胞移植治疗感音神经性耳聋实验研究的供体细胞.
목적:종성년웅성돈서지방중분리배양지방간세포,위지방간세포이식치료감음신경성이롱적실험연구창조조건.방법:실험우2005-12/2006-03재하남성고등학교림상의학중점학과개방실험실완성.성년웅성돈서,체질량500～750 g.분리배양돈서지방조직,배양삼사천후수차환액.도치현미경하관찰유대량세포첩벽화표부적혈세포,용린산완충액반복충세거제표부적세포,가입DMEM기출배양기+10%태우혈청배양액.전대전용소량린산완충액세조1차,가입0.25%이단백매화0.02%을이알사을산2 mL,견대부분세포포질회축、형태변원,가입2 mL함혈청적DMEM배양액종지소화,수집세포현액、계수,이2×104/cm2세포밀도접충우신적배양명내.이삼천체도융합상태,계속전대배양.사갑기우담서람측정제1、3、10대지방간세포생장곡선,류식세포의검측지방간세포표면표지.결과:①원대배양현시배양적지방간충질간세포2 d좌우개시첩벽,7 d좌우가체90%융합,기본상위사형성섬유양세포형태.②생장곡선현시,돈서지방간세포재1～3대증치능력교강,이제1대세포최강,10대이후증식능력감약,세포생장진입평태기.경소화전대후적제1、3、10대세포균경력24～48 h적잠복기,차후위3～5 d대수생장기,축점진입생장평태기.14대이전구유활약적증식능력.③지방간세포표지CD105,CD44정양성표체,이조혈간세포표지GD34음성표체.결론:성공지건립료일충분리배양돈서지방간충질간세포적방법,기생장은정、증식교쾌,가작위간세포이식치료감음신경성이롱실험연구적공체세포.