中国血液流变学杂志
中國血液流變學雜誌
중국혈액류변학잡지
CHINESE JOURNAL OF HEMORHEOLOGY
2008年
4期
465-467,510
,共4页
范俊%杨润琳%邹美芬%曹国宪%李文新
範俊%楊潤琳%鄒美芬%曹國憲%李文新
범준%양윤림%추미분%조국헌%리문신
小鼠%甲状腺%甲状腺细胞%原代培养%碘
小鼠%甲狀腺%甲狀腺細胞%原代培養%碘
소서%갑상선%갑상선세포%원대배양%전
目的 建立小鼠甲状腺细胞的原代培养方法,并研究其体外摄碘功能,为甲状腺功能的体外研究奠定基础.方法 取小鼠甲状腺组织,去筋膜和结缔组织,剪碎后用1 mg/mL的胶原酶于37℃消化2h,其间问歇振荡数次,1,200g离心收集细胞沉淀,Ficoll分离得甲状腺单个核细胞,灭菌PBS洗涤细胞2遍,用RPMI1640完全培养基调整细胞浓度至2×10 5/mL,24孔板常规接利,培养,以"半量换液法"连续培养数天.用抗甲状腺球蛋白抗体为识别抗体的间接免疫荧光法检测原代培养细胞甲状腺球蛋白的表达状况.体外摄碘试验于每孔加入0.1μci125I后继续培养2h,用冰冷的PBS洗涤细胞数遍,裂解细胞并进行蛋白浓度测定及放射性计数.温度及竞争物阻断试验分别在0℃～4℃和加入100mmol/L NaClO4的条件下进行.结果 采用上述方法获得的小鼠甲状腺原代培养细胞在体外可形成甲状腺细胞所特有的"次级滤泡样"结构.免疫荧光检测结果显示,细胞上有甲状腺细胞特有的甲状腺球蛋白的表达.体外摄碘试验结果显示,用该方法培养的甲状腺细胞具备良好的摄碘功能,该功能具有对温度和高氯酸盐的双重敏感性.结论 建立了简便可行的小鼠甲状腺细胞的原代培养方法,为开展甲状腺细胞的摄碘及其他相关功能的研究奠定了基础.
目的 建立小鼠甲狀腺細胞的原代培養方法,併研究其體外攝碘功能,為甲狀腺功能的體外研究奠定基礎.方法 取小鼠甲狀腺組織,去觔膜和結締組織,剪碎後用1 mg/mL的膠原酶于37℃消化2h,其間問歇振盪數次,1,200g離心收集細胞沉澱,Ficoll分離得甲狀腺單箇覈細胞,滅菌PBS洗滌細胞2遍,用RPMI1640完全培養基調整細胞濃度至2×10 5/mL,24孔闆常規接利,培養,以"半量換液法"連續培養數天.用抗甲狀腺毬蛋白抗體為識彆抗體的間接免疫熒光法檢測原代培養細胞甲狀腺毬蛋白的錶達狀況.體外攝碘試驗于每孔加入0.1μci125I後繼續培養2h,用冰冷的PBS洗滌細胞數遍,裂解細胞併進行蛋白濃度測定及放射性計數.溫度及競爭物阻斷試驗分彆在0℃～4℃和加入100mmol/L NaClO4的條件下進行.結果 採用上述方法穫得的小鼠甲狀腺原代培養細胞在體外可形成甲狀腺細胞所特有的"次級濾泡樣"結構.免疫熒光檢測結果顯示,細胞上有甲狀腺細胞特有的甲狀腺毬蛋白的錶達.體外攝碘試驗結果顯示,用該方法培養的甲狀腺細胞具備良好的攝碘功能,該功能具有對溫度和高氯痠鹽的雙重敏感性.結論 建立瞭簡便可行的小鼠甲狀腺細胞的原代培養方法,為開展甲狀腺細胞的攝碘及其他相關功能的研究奠定瞭基礎.
목적 건립소서갑상선세포적원대배양방법,병연구기체외섭전공능,위갑상선공능적체외연구전정기출.방법 취소서갑상선조직,거근막화결체조직,전쇄후용1 mg/mL적효원매우37℃소화2h,기간문헐진탕수차,1,200g리심수집세포침정,Ficoll분리득갑상선단개핵세포,멸균PBS세조세포2편,용RPMI1640완전배양기조정세포농도지2×10 5/mL,24공판상규접리,배양,이"반량환액법"련속배양수천.용항갑상선구단백항체위식별항체적간접면역형광법검측원대배양세포갑상선구단백적표체상황.체외섭전시험우매공가입0.1μci125I후계속배양2h,용빙랭적PBS세조세포수편,렬해세포병진행단백농도측정급방사성계수.온도급경쟁물조단시험분별재0℃～4℃화가입100mmol/L NaClO4적조건하진행.결과 채용상술방법획득적소서갑상선원대배양세포재체외가형성갑상선세포소특유적"차급려포양"결구.면역형광검측결과현시,세포상유갑상선세포특유적갑상선구단백적표체.체외섭전시험결과현시,용해방법배양적갑상선세포구비량호적섭전공능,해공능구유대온도화고록산염적쌍중민감성.결론 건립료간편가행적소서갑상선세포적원대배양방법,위개전갑상선세포적섭전급기타상관공능적연구전정료기출.
