南方水产
南方水產
남방수산
SOUTH CHINA FISHERIES SCIENCE
2010年
5期
68-73
,共6页
胡则辉%徐君卓%王跃斌%柴学军
鬍則輝%徐君卓%王躍斌%柴學軍
호칙휘%서군탁%왕약빈%시학군
三疣梭子蟹%SRAP%正交设计%优化
三疣梭子蟹%SRAP%正交設計%優化
삼우사자해%SRAP%정교설계%우화
相关序列扩增多态性(sequence related amplified polymorphism,SRAP)是一种多态性高的新型分子标记,其扩增结果稳定,容易操作和引物通用性高,在遗传多样性分析、种质鉴定和遗传图谱构建等方面的广泛应用逐渐从植物转移到水产动物中.为了建立三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)SRAP技术体系,文章利用正交设计L16(45)对三疣梭子蟹SRAP-PCR反应体系的5因素[TaqDNA聚合酶、镁离子(Mg2+)、模板、三磷酸脱氧核苷(dNTPs)和引物]在4个水平上进行优化试验,结果得出各因素水平变化对PCR反应的影响从大到小依次为模板(纯度1.75～1.90,质量浓度10～70 ng·μL-1),Mg2+(1.60～2.00 mmol·L-1),dNTPs(0.10～0.40 mmol·L-1),TaqDNA聚合酶(0.50～2.00 U)和引物(0.10～0.40 μmol·L-1);筛选出各反应因素的最佳水平,建立三疣梭子蟹SRAP-PCR反应的最佳体系(25 μL)为TaqDNA聚合酶0.50 U,Mg2+ 2.20 mmol·L-1,模板DNA 10 ng,dNTPs 0.20 mmol·L-1,引物0.20 μmol·L-1.这一优化体系可望在三疣梭子蟹遗传多样性和性别连锁标记等研究中应用.
相關序列擴增多態性(sequence related amplified polymorphism,SRAP)是一種多態性高的新型分子標記,其擴增結果穩定,容易操作和引物通用性高,在遺傳多樣性分析、種質鑒定和遺傳圖譜構建等方麵的廣汎應用逐漸從植物轉移到水產動物中.為瞭建立三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)SRAP技術體繫,文章利用正交設計L16(45)對三疣梭子蟹SRAP-PCR反應體繫的5因素[TaqDNA聚閤酶、鎂離子(Mg2+)、模闆、三燐痠脫氧覈苷(dNTPs)和引物]在4箇水平上進行優化試驗,結果得齣各因素水平變化對PCR反應的影響從大到小依次為模闆(純度1.75～1.90,質量濃度10～70 ng·μL-1),Mg2+(1.60～2.00 mmol·L-1),dNTPs(0.10～0.40 mmol·L-1),TaqDNA聚閤酶(0.50～2.00 U)和引物(0.10～0.40 μmol·L-1);篩選齣各反應因素的最佳水平,建立三疣梭子蟹SRAP-PCR反應的最佳體繫(25 μL)為TaqDNA聚閤酶0.50 U,Mg2+ 2.20 mmol·L-1,模闆DNA 10 ng,dNTPs 0.20 mmol·L-1,引物0.20 μmol·L-1.這一優化體繫可望在三疣梭子蟹遺傳多樣性和性彆連鎖標記等研究中應用.
상관서렬확증다태성(sequence related amplified polymorphism,SRAP)시일충다태성고적신형분자표기,기확증결과은정,용역조작화인물통용성고,재유전다양성분석、충질감정화유전도보구건등방면적엄범응용축점종식물전이도수산동물중.위료건립삼우사자해(Portunus trituberculatus)SRAP기술체계,문장이용정교설계L16(45)대삼우사자해SRAP-PCR반응체계적5인소[TaqDNA취합매、미리자(Mg2+)、모판、삼린산탈양핵감(dNTPs)화인물]재4개수평상진행우화시험,결과득출각인소수평변화대PCR반응적영향종대도소의차위모판(순도1.75～1.90,질량농도10～70 ng·μL-1),Mg2+(1.60～2.00 mmol·L-1),dNTPs(0.10～0.40 mmol·L-1),TaqDNA취합매(0.50～2.00 U)화인물(0.10～0.40 μmol·L-1);사선출각반응인소적최가수평,건립삼우사자해SRAP-PCR반응적최가체계(25 μL)위TaqDNA취합매0.50 U,Mg2+ 2.20 mmol·L-1,모판DNA 10 ng,dNTPs 0.20 mmol·L-1,인물0.20 μmol·L-1.저일우화체계가망재삼우사자해유전다양성화성별련쇄표기등연구중응용.
