生物医学工程与临床
生物醫學工程與臨床
생물의학공정여림상
BIOMEDICAL ENGINEERING AND CLINICAL MEDICINE
2012年
2期
181-185
,共5页
薛亚军%赵耀东%董艳%蔡如珏%卢亦成%楼美清
薛亞軍%趙耀東%董豔%蔡如玨%盧亦成%樓美清
설아군%조요동%동염%채여각%로역성%루미청
胶质细胞生长因子2%原核表达%蛋白纯化%pET-32b
膠質細胞生長因子2%原覈錶達%蛋白純化%pET-32b
효질세포생장인자2%원핵표체%단백순화%pET-32b
目的 通过原核表达的方法得到胶质细胞生长因子2(GGF2)重组蛋白.方法 将不含信号肽编码序列的GGF2基因用亚克隆的方法自PVT-GGF2质粒克隆至PCXJI8质粒,再由PCXJ18-GGF2质粒克隆至pET-32b(+)质粒,构建pET32b(+)-GGF2表达载体.表达载体转染4种宿主菌,筛选合适者.优化表达时程和IPTG诱导剂量.GGF2大量表达后回收包涵体,复性.复性产物利用His Bind树脂进一步纯化.纯化产物用Western blot鉴定.结果 测序鉴定表明,成功构建pET-32b(+)-GGF2表达载体.筛选结果表明Origami B(DE3)为合适宿主菌.适宜的表达条件为30℃诱导前扩增,浓度25 μmol/L IPTG,37℃诱导2h.所表达外源蛋白相对分子质最和预期一致.回收、纯化后得到纯度约为96％的产物.Western blot鉴定表明所获为GGF2重组蛋白.结论 原核表达方法得到足量GGF2重组蛋白.
目的 通過原覈錶達的方法得到膠質細胞生長因子2(GGF2)重組蛋白.方法 將不含信號肽編碼序列的GGF2基因用亞剋隆的方法自PVT-GGF2質粒剋隆至PCXJI8質粒,再由PCXJ18-GGF2質粒剋隆至pET-32b(+)質粒,構建pET32b(+)-GGF2錶達載體.錶達載體轉染4種宿主菌,篩選閤適者.優化錶達時程和IPTG誘導劑量.GGF2大量錶達後迴收包涵體,複性.複性產物利用His Bind樹脂進一步純化.純化產物用Western blot鑒定.結果 測序鑒定錶明,成功構建pET-32b(+)-GGF2錶達載體.篩選結果錶明Origami B(DE3)為閤適宿主菌.適宜的錶達條件為30℃誘導前擴增,濃度25 μmol/L IPTG,37℃誘導2h.所錶達外源蛋白相對分子質最和預期一緻.迴收、純化後得到純度約為96％的產物.Western blot鑒定錶明所穫為GGF2重組蛋白.結論 原覈錶達方法得到足量GGF2重組蛋白.
목적 통과원핵표체적방법득도효질세포생장인자2(GGF2)중조단백.방법 장불함신호태편마서렬적GGF2기인용아극륭적방법자PVT-GGF2질립극륭지PCXJI8질립,재유PCXJ18-GGF2질립극륭지pET-32b(+)질립,구건pET32b(+)-GGF2표체재체.표체재체전염4충숙주균,사선합괄자.우화표체시정화IPTG유도제량.GGF2대량표체후회수포함체,복성.복성산물이용His Bind수지진일보순화.순화산물용Western blot감정.결과 측서감정표명,성공구건pET-32b(+)-GGF2표체재체.사선결과표명Origami B(DE3)위합괄숙주균.괄의적표체조건위30℃유도전확증,농도25 μmol/L IPTG,37℃유도2h.소표체외원단백상대분자질최화예기일치.회수、순화후득도순도약위96％적산물.Western blot감정표명소획위GGF2중조단백.결론 원핵표체방법득도족량GGF2중조단백.
