江苏大学学报(医学版)
江囌大學學報(醫學版)
강소대학학보(의학판)
ACADEMIC JOURNAL OF JIANGSU UNIVERSITY(MEDICINE)
2004年
1期
7-10
,共4页
周丽萍%赵燕%王卉放%丁建霞
週麗萍%趙燕%王卉放%丁建霞
주려평%조연%왕훼방%정건하
枯草芽孢杆菌%葡萄糖脱氢酶%克隆%表达
枯草芽孢桿菌%葡萄糖脫氫酶%剋隆%錶達
고초아포간균%포도당탈경매%극륭%표체
目的:运用分子生物学手段获得葡萄糖脱氢酶基因,并表达该基因.方法:根据枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因序列设计引物,通过PCR获得该基因并与源序列进行比较分析,与表达载体pET22b连接后转化至大肠杆菌JM109(DE3)进行表达,并在全自动生化分析仪上用速率法测定其活性.结果:克隆到的葡萄糖脱氢酶基因与源基因的同源性为99%,克隆到的GDH编码的氨基酸序列167位左右存在突变:EVI(GAAGTGATT)→AF(GCGTTT),利用酶的初提液测定的葡萄糖脱氢酶活力为75 U/L,比活性为10 U/mg.结论:运用基因工程手段获得了葡萄糖脱氢酶基因,与表达载体连接后的重组体经大肠杆菌初步表达有活力,经诱导有望获得高产量的葡萄糖脱氢酶,从而为临床服务.
目的:運用分子生物學手段穫得葡萄糖脫氫酶基因,併錶達該基因.方法:根據枯草芽孢桿菌葡萄糖脫氫酶基因序列設計引物,通過PCR穫得該基因併與源序列進行比較分析,與錶達載體pET22b連接後轉化至大腸桿菌JM109(DE3)進行錶達,併在全自動生化分析儀上用速率法測定其活性.結果:剋隆到的葡萄糖脫氫酶基因與源基因的同源性為99%,剋隆到的GDH編碼的氨基痠序列167位左右存在突變:EVI(GAAGTGATT)→AF(GCGTTT),利用酶的初提液測定的葡萄糖脫氫酶活力為75 U/L,比活性為10 U/mg.結論:運用基因工程手段穫得瞭葡萄糖脫氫酶基因,與錶達載體連接後的重組體經大腸桿菌初步錶達有活力,經誘導有望穫得高產量的葡萄糖脫氫酶,從而為臨床服務.
목적:운용분자생물학수단획득포도당탈경매기인,병표체해기인.방법:근거고초아포간균포도당탈경매기인서렬설계인물,통과PCR획득해기인병여원서렬진행비교분석,여표체재체pET22b련접후전화지대장간균JM109(DE3)진행표체,병재전자동생화분석의상용속솔법측정기활성.결과:극륭도적포도당탈경매기인여원기인적동원성위99%,극륭도적GDH편마적안기산서렬167위좌우존재돌변:EVI(GAAGTGATT)→AF(GCGTTT),이용매적초제액측정적포도당탈경매활력위75 U/L,비활성위10 U/mg.결론:운용기인공정수단획득료포도당탈경매기인,여표체재체련접후적중조체경대장간균초보표체유활력,경유도유망획득고산량적포도당탈경매,종이위림상복무.
