药物生物技术
藥物生物技術
약물생물기술
PHARMACEUTICAL BIOTECHNOLOGY
2006年
3期
159-165
,共7页
林洁%黄永城%王学军%吴洁%刘景晶
林潔%黃永城%王學軍%吳潔%劉景晶
림길%황영성%왕학군%오길%류경정
L-门冬酰胺酶Ⅱ%嵌合酶%表面呈现%外源多肽%抗原表位%表位扫描
L-門鼕酰胺酶Ⅱ%嵌閤酶%錶麵呈現%外源多肽%抗原錶位%錶位掃描
L-문동선알매Ⅱ%감합매%표면정현%외원다태%항원표위%표위소묘
为了研究大肠杆菌L-门冬酰胺酶Ⅱ(L-asparaginaseⅡ,AnsB)能否作为多肽呈现载体.选取乙肝病毒表面抗原(HBSAg)preS2结构域的核心抗原表位区作为模型多肽,构建了两种表达载体pET28a-AnsB-preS2L和pET28a-AnsB-preS2C,分别转化至表达宿主菌E. coli BL-21,LB培养基(Kanr)培养,乳糖诱导高效表达,通过渗透休克,DEAE 52-cellulose柱层析纯化获得了在AnsB C端融合有线状和环状模型多肽的嵌合酶AnsB-preS2L和AnsB-preS2c,两种嵌合酶分别保留了AnsB 81%、25%的催化活力,两者的pH稳定性均与AnsB相符.ELISA检测结果显示AnsB-preS2L与抗preS2抗体的结合能力较AnsB-preS2c强.证明AnsB确实能够作为一种表面呈现载体将线性外源多肽以融合表达的方式呈现在酶分子的表面,最终形成一种在每个亚基表面呈现有多肽的嵌合酶.最后,用富含带电序列的8肽(KRKRKKSR)替换核心抗原表位区作为模型多肽,进一步验证了AnsB作为多肽呈现载体的可行性和通用性.
為瞭研究大腸桿菌L-門鼕酰胺酶Ⅱ(L-asparaginaseⅡ,AnsB)能否作為多肽呈現載體.選取乙肝病毒錶麵抗原(HBSAg)preS2結構域的覈心抗原錶位區作為模型多肽,構建瞭兩種錶達載體pET28a-AnsB-preS2L和pET28a-AnsB-preS2C,分彆轉化至錶達宿主菌E. coli BL-21,LB培養基(Kanr)培養,乳糖誘導高效錶達,通過滲透休剋,DEAE 52-cellulose柱層析純化穫得瞭在AnsB C耑融閤有線狀和環狀模型多肽的嵌閤酶AnsB-preS2L和AnsB-preS2c,兩種嵌閤酶分彆保留瞭AnsB 81%、25%的催化活力,兩者的pH穩定性均與AnsB相符.ELISA檢測結果顯示AnsB-preS2L與抗preS2抗體的結閤能力較AnsB-preS2c彊.證明AnsB確實能夠作為一種錶麵呈現載體將線性外源多肽以融閤錶達的方式呈現在酶分子的錶麵,最終形成一種在每箇亞基錶麵呈現有多肽的嵌閤酶.最後,用富含帶電序列的8肽(KRKRKKSR)替換覈心抗原錶位區作為模型多肽,進一步驗證瞭AnsB作為多肽呈現載體的可行性和通用性.
위료연구대장간균L-문동선알매Ⅱ(L-asparaginaseⅡ,AnsB)능부작위다태정현재체.선취을간병독표면항원(HBSAg)preS2결구역적핵심항원표위구작위모형다태,구건료량충표체재체pET28a-AnsB-preS2L화pET28a-AnsB-preS2C,분별전화지표체숙주균E. coli BL-21,LB배양기(Kanr)배양,유당유도고효표체,통과삼투휴극,DEAE 52-cellulose주층석순화획득료재AnsB C단융합유선상화배상모형다태적감합매AnsB-preS2L화AnsB-preS2c,량충감합매분별보류료AnsB 81%、25%적최화활력,량자적pH은정성균여AnsB상부.ELISA검측결과현시AnsB-preS2L여항preS2항체적결합능력교AnsB-preS2c강.증명AnsB학실능구작위일충표면정현재체장선성외원다태이융합표체적방식정현재매분자적표면,최종형성일충재매개아기표면정현유다태적감합매.최후,용부함대전서렬적8태(KRKRKKSR)체환핵심항원표위구작위모형다태,진일보험증료AnsB작위다태정현재체적가행성화통용성.
