生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2007年
2期
233-235
,共3页
展德文%张玉静%刘昌%袁盛凌%刘纯杰%张兆山
展德文%張玉靜%劉昌%袁盛凌%劉純傑%張兆山
전덕문%장옥정%류창%원성릉%류순걸%장조산
小鼠%层粘连蛋白α5链%LG1-3%表达%多克隆抗体
小鼠%層粘連蛋白α5鏈%LG1-3%錶達%多剋隆抗體
소서%층점련단백α5련%LG1-3%표체%다극륭항체
目的:用原核表达的方法获得带有6个His标记的小鼠层粘连蛋白α5链LG1-3组件的重组蛋白,并制备其多克隆抗体.方法:利用RT-PCR技术,从小鼠心肌组织中扩增出小鼠层粘连蛋白α5链LG1-3组件cDNA片段,将该片段与原核表达载体pET-28a连接,构建重组表达质粒pETLG1-3并转化大肠杆菌BL21(DE3)获得重组表达菌株.用IPTG诱导重组大肠杆菌BL21(DE3)/pETLG1-3表达,SDS-PAGE分析表明在相对分子质量60 000处有特异性重组蛋白表达条带,并经Western印迹进一步鉴定.用含融合蛋白的聚丙烯酰胺凝胶颗粒免疫家兔,制备抗小鼠层粘连蛋白α5链LG1-3组件多克隆抗体,ELISA方法检测抗体滴度.结果:从小鼠心肌组织中克隆了层粘连蛋白α5链LG3组件的基因,并在大肠杆菌得以表达和纯化;制备了重组蛋白的多克隆抗体,其滴度可达到1:10 240.结论:小鼠层粘连蛋白α5链LG1-3组件重组蛋白及其多克隆抗体的获得,为后续研究其功能打下了基础.
目的:用原覈錶達的方法穫得帶有6箇His標記的小鼠層粘連蛋白α5鏈LG1-3組件的重組蛋白,併製備其多剋隆抗體.方法:利用RT-PCR技術,從小鼠心肌組織中擴增齣小鼠層粘連蛋白α5鏈LG1-3組件cDNA片段,將該片段與原覈錶達載體pET-28a連接,構建重組錶達質粒pETLG1-3併轉化大腸桿菌BL21(DE3)穫得重組錶達菌株.用IPTG誘導重組大腸桿菌BL21(DE3)/pETLG1-3錶達,SDS-PAGE分析錶明在相對分子質量60 000處有特異性重組蛋白錶達條帶,併經Western印跡進一步鑒定.用含融閤蛋白的聚丙烯酰胺凝膠顆粒免疫傢兔,製備抗小鼠層粘連蛋白α5鏈LG1-3組件多剋隆抗體,ELISA方法檢測抗體滴度.結果:從小鼠心肌組織中剋隆瞭層粘連蛋白α5鏈LG3組件的基因,併在大腸桿菌得以錶達和純化;製備瞭重組蛋白的多剋隆抗體,其滴度可達到1:10 240.結論:小鼠層粘連蛋白α5鏈LG1-3組件重組蛋白及其多剋隆抗體的穫得,為後續研究其功能打下瞭基礎.
목적:용원핵표체적방법획득대유6개His표기적소서층점련단백α5련LG1-3조건적중조단백,병제비기다극륭항체.방법:이용RT-PCR기술,종소서심기조직중확증출소서층점련단백α5련LG1-3조건cDNA편단,장해편단여원핵표체재체pET-28a련접,구건중조표체질립pETLG1-3병전화대장간균BL21(DE3)획득중조표체균주.용IPTG유도중조대장간균BL21(DE3)/pETLG1-3표체,SDS-PAGE분석표명재상대분자질량60 000처유특이성중조단백표체조대,병경Western인적진일보감정.용함융합단백적취병희선알응효과립면역가토,제비항소서층점련단백α5련LG1-3조건다극륭항체,ELISA방법검측항체적도.결과:종소서심기조직중극륭료층점련단백α5련LG3조건적기인,병재대장간균득이표체화순화;제비료중조단백적다극륭항체,기적도가체도1:10 240.결론:소서층점련단백α5련LG1-3조건중조단백급기다극륭항체적획득,위후속연구기공능타하료기출.
