解剖学研究
解剖學研究
해부학연구
ANATOMY RESEARCH
2007年
6期
410-412,453
,共4页
林景泰%梁建忠%李敏雄%陈盛强%彭和平
林景泰%樑建忠%李敏雄%陳盛彊%彭和平
림경태%량건충%리민웅%진성강%팽화평
腺病毒%B7-1基因%基因治疗
腺病毒%B7-1基因%基因治療
선병독%B7-1기인%기인치료
目的 构建表达B7-1基因的重组腺病毒载体,制备相应的复制缺陷型重组腺病毒并检测其在喉癌细胞中的表达.方法 构建携带人B7-1基因的重组穿梭载体pAdtrack-B7-1,Pme I线性化后与腺病毒载体pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,通过同源重组得到重组腺病毒载体pAd-B7-1.将重组腺病毒载体转染HEK293包装细胞制备重组腺病毒,应用病毒悬液感染人喉癌细胞株,RT-PCR检测感染细胞中B7-1基因mRNA表达.结果 酶切鉴定证实阳性pAdTrack B7-1重组穿梭载体含有目的基因B7-1,同源重组后制备的病毒载体DNA经酶切鉴定获得了阳性重组腺病毒载体,该载体能有效转染HEK293细胞并在细胞内成功包装,转染3d后可以观察到绿色荧光蛋白(GFP)表达并逐渐增多、增强.制备的Ad-B7在体外能有效感染Hep-2细胞,感染后可维持6d高水平的B7-1的表达,整体表达可持续两周.结论 成功构建了同时表达B7-1的重组腺病毒载体并制备出重组腺病毒颗粒,该病毒能有效地感染喉癌细胞并表达高水平的B7-1基因,为进一步研究B7-1的功能及应用B7-1进行基因治疗奠定基础.
目的 構建錶達B7-1基因的重組腺病毒載體,製備相應的複製缺陷型重組腺病毒併檢測其在喉癌細胞中的錶達.方法 構建攜帶人B7-1基因的重組穿梭載體pAdtrack-B7-1,Pme I線性化後與腺病毒載體pAdEasy-1共轉化大腸桿菌BJ5183,通過同源重組得到重組腺病毒載體pAd-B7-1.將重組腺病毒載體轉染HEK293包裝細胞製備重組腺病毒,應用病毒懸液感染人喉癌細胞株,RT-PCR檢測感染細胞中B7-1基因mRNA錶達.結果 酶切鑒定證實暘性pAdTrack B7-1重組穿梭載體含有目的基因B7-1,同源重組後製備的病毒載體DNA經酶切鑒定穫得瞭暘性重組腺病毒載體,該載體能有效轉染HEK293細胞併在細胞內成功包裝,轉染3d後可以觀察到綠色熒光蛋白(GFP)錶達併逐漸增多、增彊.製備的Ad-B7在體外能有效感染Hep-2細胞,感染後可維持6d高水平的B7-1的錶達,整體錶達可持續兩週.結論 成功構建瞭同時錶達B7-1的重組腺病毒載體併製備齣重組腺病毒顆粒,該病毒能有效地感染喉癌細胞併錶達高水平的B7-1基因,為進一步研究B7-1的功能及應用B7-1進行基因治療奠定基礎.
목적 구건표체B7-1기인적중조선병독재체,제비상응적복제결함형중조선병독병검측기재후암세포중적표체.방법 구건휴대인B7-1기인적중조천사재체pAdtrack-B7-1,Pme I선성화후여선병독재체pAdEasy-1공전화대장간균BJ5183,통과동원중조득도중조선병독재체pAd-B7-1.장중조선병독재체전염HEK293포장세포제비중조선병독,응용병독현액감염인후암세포주,RT-PCR검측감염세포중B7-1기인mRNA표체.결과 매절감정증실양성pAdTrack B7-1중조천사재체함유목적기인B7-1,동원중조후제비적병독재체DNA경매절감정획득료양성중조선병독재체,해재체능유효전염HEK293세포병재세포내성공포장,전염3d후가이관찰도록색형광단백(GFP)표체병축점증다、증강.제비적Ad-B7재체외능유효감염Hep-2세포,감염후가유지6d고수평적B7-1적표체,정체표체가지속량주.결론 성공구건료동시표체B7-1적중조선병독재체병제비출중조선병독과립,해병독능유효지감염후암세포병표체고수평적B7-1기인,위진일보연구B7-1적공능급응용B7-1진행기인치료전정기출.
