生物医学工程学杂志
生物醫學工程學雜誌
생물의학공정학잡지
2008年
2期
407-412
,共6页
结缔组织生长因子%RNA干扰%肺成纤维细胞%表型转化
結締組織生長因子%RNA榦擾%肺成纖維細胞%錶型轉化
결체조직생장인자%RNA간우%폐성섬유세포%표형전화
近期研究表明,结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)参与了肺成纤维细胞表型转化,与肺纤维化的形成关系密切.因此,本研究应用siRNA表达载体介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,将CTGF-siRNA表达质粒稳定转染人肺成纤维细胞MRC-5,并通过定量PCR、Western-blot、细胞生长曲线及群体倍增时间、免疫细胞化学测定等方法检测基因表达、细胞增殖及表型转化等变化.结果显示,与非特异对照Scrambled-siRNA质粒稳定转染的MRC-5细胞或未转染MRC-5细胞相比,CTGF-siRNA表达质粒稳定转染的MRC-5细胞的CTGF表达明显降低;细胞增殖能力明显降低,群体倍增时间延长,由24.63或25.05 h延长至31.14 h(P＜0.05);TGFβ1刺激24 h后,细胞内α-平滑肌肌动蛋白α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原及纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的表达均明显下降.本研究提示,通过RNA干扰使CTGF基因沉默后,在体外可明显抑制MRC-5肺成纤维细胞的增殖、表型转化及细胞外基质的合成,可为基因治疗肺纤维化提供实验依据.
近期研究錶明,結締組織生長因子(Connective tissue growth factor,CTGF)參與瞭肺成纖維細胞錶型轉化,與肺纖維化的形成關繫密切.因此,本研究應用siRNA錶達載體介導的RNA榦擾(RNA interference,RNAi)技術,將CTGF-siRNA錶達質粒穩定轉染人肺成纖維細胞MRC-5,併通過定量PCR、Western-blot、細胞生長麯線及群體倍增時間、免疫細胞化學測定等方法檢測基因錶達、細胞增殖及錶型轉化等變化.結果顯示,與非特異對照Scrambled-siRNA質粒穩定轉染的MRC-5細胞或未轉染MRC-5細胞相比,CTGF-siRNA錶達質粒穩定轉染的MRC-5細胞的CTGF錶達明顯降低;細胞增殖能力明顯降低,群體倍增時間延長,由24.63或25.05 h延長至31.14 h(P＜0.05);TGFβ1刺激24 h後,細胞內α-平滑肌肌動蛋白α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型膠原及纖維連接蛋白(fibronectin,FN)的錶達均明顯下降.本研究提示,通過RNA榦擾使CTGF基因沉默後,在體外可明顯抑製MRC-5肺成纖維細胞的增殖、錶型轉化及細胞外基質的閤成,可為基因治療肺纖維化提供實驗依據.
근기연구표명,결체조직생장인자(Connective tissue growth factor,CTGF)삼여료폐성섬유세포표형전화,여폐섬유화적형성관계밀절.인차,본연구응용siRNA표체재체개도적RNA간우(RNA interference,RNAi)기술,장CTGF-siRNA표체질립은정전염인폐성섬유세포MRC-5,병통과정량PCR、Western-blot、세포생장곡선급군체배증시간、면역세포화학측정등방법검측기인표체、세포증식급표형전화등변화.결과현시,여비특이대조Scrambled-siRNA질립은정전염적MRC-5세포혹미전염MRC-5세포상비,CTGF-siRNA표체질립은정전염적MRC-5세포적CTGF표체명현강저;세포증식능력명현강저,군체배증시간연장,유24.63혹25.05 h연장지31.14 h(P＜0.05);TGFβ1자격24 h후,세포내α-평활기기동단백α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ형효원급섬유련접단백(fibronectin,FN)적표체균명현하강.본연구제시,통과RNA간우사CTGF기인침묵후,재체외가명현억제MRC-5폐성섬유세포적증식、표형전화급세포외기질적합성,가위기인치료폐섬유화제공실험의거.
