CAJ | 학술논문

本研究探讨密度梯度离心法加贴壁法方式培养白血病儿童骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)的条件并观察其体外增殖能力、生长曲线、多向分化等生物学特性.通过密度梯度离心、贴壁法分离白血病患儿的MSC,观察细胞的形态变化及生长曲线、流式细胞术测定其CD29、CD105、CD45、CD34、CD14、HLA-DR等表达,通过成脂、成骨诱导研究其多向分化能力.结果表明:密度梯度离心法联合贴壁法可以培养出白血病儿童骨髓来源的MSC,初诊白血病儿童骨髓来源的MSC培养成功率为57.1%,缓解白血病儿童骨髓来源的MSC成功率为41.2%,接种密度越大成功率越高,初诊白血病儿童的MSC形成集落数目较多且生长较快.形态学观察显示,骨髓间充质干细胞接种24小时即贴壁,呈集落生长,形态多样;3天后贴壁细胞增殖,逐渐以梭形细胞为主;2-3周细胞基本达80%-90%融合,第3代后细胞呈均匀一致的长梭形.细胞传代后3天内处于潜伏期,3天后进入生长期,8天后进入平台期.检测第2代后细胞免疫表型显示,MSC的CD29、CD105表达率达95%以上,CD45、CD34、CD14、HLA-DR极低表达或不表达.MSC能成功诱导成脂肪细胞及成骨细胞,油红O染色和茜素红染色为阳性.在合适的条件下冻存对细胞影响不大.结论:①白血病患儿骨髓培养出的贴壁细胞是MSC,骨髓含量在1 ml以上且方法得当可以培养出MSC;②初诊的白血病惠儿的骨髓相对容易培养出骨髓间充质干细胞,形成的集落较缓解期白血病患儿多,增长速度较快;③白血病儿童来源的MSC具有MSC的共同生物学特性.
본연구탐토밀도제도리심법가첩벽법방식배양백혈병인동골수간충질간세포(mesenchymal stem cell,MSC)적조건병관찰기체외증식능력、생장곡선、다향분화등생물학특성.통과밀도제도리심、첩벽법분리백혈병환인적MSC,관찰세포적형태변화급생장곡선、류식세포술측정기CD29、CD105、CD45、CD34、CD14、HLA-DR등표체,통과성지、성골유도연구기다향분화능력.결과표명:밀도제도리심법연합첩벽법가이배양출백혈병인동골수래원적MSC,초진백혈병인동골수래원적MSC배양성공솔위57.1%,완해백혈병인동골수래원적MSC성공솔위41.2%,접충밀도월대성공솔월고,초진백혈병인동적MSC형성집락수목교다차생장교쾌.형태학관찰현시,골수간충질간세포접충24소시즉첩벽,정집락생장,형태다양;3천후첩벽세포증식,축점이사형세포위주;2-3주세포기본체80%-90%융합,제3대후세포정균균일치적장사형.세포전대후3천내처우잠복기,3천후진입생장기,8천후진입평태기.검측제2대후세포면역표형현시,MSC적CD29、CD105표체솔체95%이상,CD45、CD34、CD14、HLA-DR겁저표체혹불표체.MSC능성공유도성지방세포급성골세포,유홍O염색화천소홍염색위양성.재합괄적조건하동존대세포영향불대.결론:①백혈병환인골수배양출적첩벽세포시MSC,골수함량재1 ml이상차방법득당가이배양출MSC;②초진적백혈병혜인적골수상대용역배양출골수간충질간세포,형성적집락교완해기백혈병환인다,증장속도교쾌;③백혈병인동래원적MSC구유MSC적공동생물학특성.