CAJ | 학술논문

目的:探讨应用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默磷脂酶Cε (phospholipase C epsilon,PLCε)基因对人膀胱癌移植瘤生长及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响.方法:人膀胱癌BIU-87细胞种植于裸鼠皮下,待移植瘤体积达40 mm3左右时,在肿瘤部位分别直接注射建构有PLCε特异性shRNA的重组表达质粒pGenesil-PLCε、阴性对照重组pGenesil-NP质粒以及0.9%氯化钠溶液;观察肿瘤体积的变化情况,30 d后处死全部裸鼠,取瘤组织,称瘤质量;瘤组织制备病理切片,HE染色观察细胞形态的变化;RT-PCR鉴定瘤组织中PLCε mRNA的表达;Western 印迹法检测瘤组织中PLCε、Bcl-2、Bax、p-Akt1/ Akt1和p-Bad/Bad蛋白的表达.结果:pGenesil-PLCε组小鼠移植瘤生长明显缓慢,瘤组织体积和质量均明显小于对照组;HE染色结果显示,瘤组织中出现细胞核固缩和裂碎等凋亡征象;RT-PCR检测结果显示, PLCε mRNA表达明显降低(P<0.05);Western 印迹法结果提示,PLCε和Bcl-2蛋白表达量明显降低,Bax蛋白表达增加,与2个对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);而Akt1、Bad蛋白的表达在实验组以及对照组中差异均无统计学意义,p-Akt1和p-Bad在移植瘤中未见表达.结论:沉默PLCε基因可明显抑制PLCε的表达,并下调Bcl-2蛋白以及上调Bax蛋白的表达,促进膀胱癌细胞凋亡而抑制肿瘤生长.
목적:탐토응용단발협RNA(short hairpin RNA,shRNA)간우기술침묵린지매Cε (phospholipase C epsilon,PLCε)기인대인방광암이식류생장급조망상관단백Bcl-2화Bax표체적영향.방법:인방광암BIU-87세포충식우라서피하,대이식류체적체40 mm3좌우시,재종류부위분별직접주사건구유PLCε특이성shRNA적중조표체질립pGenesil-PLCε、음성대조중조pGenesil-NP질립이급0.9%록화납용액;관찰종류체적적변화정황,30 d후처사전부라서,취류조직,칭류질량;류조직제비병리절편,HE염색관찰세포형태적변화;RT-PCR감정류조직중PLCε mRNA적표체;Western 인적법검측류조직중PLCε、Bcl-2、Bax、p-Akt1/ Akt1화p-Bad/Bad단백적표체.결과:pGenesil-PLCε조소서이식류생장명현완만,류조직체적화질량균명현소우대조조;HE염색결과현시,류조직중출현세포핵고축화렬쇄등조망정상;RT-PCR검측결과현시, PLCε mRNA표체명현강저(P<0.05);Western 인적법결과제시,PLCε화Bcl-2단백표체량명현강저,Bax단백표체증가,여2개대조조비교,차이균유통계학의의(P<0.05);이Akt1、Bad단백적표체재실험조이급대조조중차이균무통계학의의,p-Akt1화p-Bad재이식류중미견표체.결론:침묵PLCε기인가명현억제PLCε적표체,병하조Bcl-2단백이급상조Bax단백적표체,촉진방광암세포조망이억제종류생장.