CAJ | 학술논문

目的构建携带肝细胞生长因子HGF的重组腺病毒表达载体.为研究HGF的功能、作用机制及临床应用奠定基础.方法以pcDNA3.0-HGF为模板,经PCR扩增得到HGF基因,将其插入到带有绿色荧光蛋白基因的穿梭载体pAdTrack-CMV-GFP中,得到重组质粒pAdTrack-CMV-HGF-GFP.将线性化的pAdTrack-CMV-HGF-GFP与pAdEasy-1质粒共转化BJ5183感受态细胞,进行同源重组,得到重组腺病毒质粒,经PacI线性化后,转染AD293细胞.结果得到重组腺病毒,转染重组腺病毒DNA的AD293细胞经荧光显微镜能观察到AD293细胞内有绿色荧光,且出现细胞病变反应(cytopathic effects,CPE),对传代的Ad-HGF进行PCR分析证实得到目的基因,感染CHL细胞,通过western blotting分析HGF蛋白表达量,从而证实重组腺病毒载体构建成功.结论腺病毒制备简便,成本低,周期短,毒性小,产量高,感染率及蛋白表达率高,成功构建Ad-HGF为进一步研究HGF并最终使其在临床应用中更为方便提供实验基础.
목적 구건휴대간세포생장인자HGF적중조선병독표체재체.위연구HGF적공능、작용궤제급림상응용전정기출.방법 이pcDNA3.0-HGF위모판,경PCR확증득도HGF기인,장기삽입도대유록색형광단백기인적천사재체pAdTrack-CMV-GFP중,득도중조질립pAdTrack-CMV-HGF-GFP.장선성화적pAdTrack-CMV-HGF-GFP여pAdEasy-1질립공전화BJ5183감수태세포,진행동원중조,득도중조선병독질립,경PacI선성화후,전염AD293세포.결과 득도중조선병독,전염중조선병독DNA적AD293세포경형광현미경능관찰도AD293세포내유록색형광,차출현세포병변반응(cytopathic effects,CPE),대전대적Ad-HGF진행PCR분석증실득도목적 기인,감염CHL세포,통과western blotting분석HGF단백표체량,종이증실중조선병독재체구건성공.결론 선병독제비간편,성본저,주기단,독성소,산량고,감염솔급단백표체솔고,성공구건Ad-HGF위진일보연구HGF병최종사기재림상응용중경위방편제공실험기출.