热带作物学报
熱帶作物學報
열대작물학보
CHINESE JOURNAL OF TROPICAL CROPS
2010年
7期
1137-1142
,共6页
朱坚%饶永斌%谢宝贵%刘新锐%孙淑静%郑域茹%陈东兴
硃堅%饒永斌%謝寶貴%劉新銳%孫淑靜%鄭域茹%陳東興
주견%요영빈%사보귀%류신예%손숙정%정역여%진동흥
人乳铁蛋白基因%表达载体%银耳%电穿孔%转化
人乳鐵蛋白基因%錶達載體%銀耳%電穿孔%轉化
인유철단백기인%표체재체%은이%전천공%전화
利用电穿孔转化法,把携带人乳铁蛋白基因(hlf)的银耳表达载体pCB-hlf导入银耳芽孢菌株Tr21,用PCR答定该基因阳性转化子,检测转基因菌株的GUS活性,并用Southem杂交检测hlf的插入位点.结果表明:电穿孔转化法的转化率可达到9.25×106个/μg质粒DNA;抗性筛选的阳性转基因菌株中均能扩增出与预期大小相符的htf、GUS和Tnos序列,且GUS基因在转基因菌株中均有表达.Southern杂交结果表明,不同转基因菌株hlf的插入位点不同,有些菌株插入了2个或更多的拷贝.RT-PCR结果表明,外源基因在银耳中能正常转录成RNA.
利用電穿孔轉化法,把攜帶人乳鐵蛋白基因(hlf)的銀耳錶達載體pCB-hlf導入銀耳芽孢菌株Tr21,用PCR答定該基因暘性轉化子,檢測轉基因菌株的GUS活性,併用Southem雜交檢測hlf的插入位點.結果錶明:電穿孔轉化法的轉化率可達到9.25×106箇/μg質粒DNA;抗性篩選的暘性轉基因菌株中均能擴增齣與預期大小相符的htf、GUS和Tnos序列,且GUS基因在轉基因菌株中均有錶達.Southern雜交結果錶明,不同轉基因菌株hlf的插入位點不同,有些菌株插入瞭2箇或更多的拷貝.RT-PCR結果錶明,外源基因在銀耳中能正常轉錄成RNA.
이용전천공전화법,파휴대인유철단백기인(hlf)적은이표체재체pCB-hlf도입은이아포균주Tr21,용PCR답정해기인양성전화자,검측전기인균주적GUS활성,병용Southem잡교검측hlf적삽입위점.결과표명:전천공전화법적전화솔가체도9.25×106개/μg질립DNA;항성사선적양성전기인균주중균능확증출여예기대소상부적htf、GUS화Tnos서렬,차GUS기인재전기인균주중균유표체.Southern잡교결과표명,불동전기인균주hlf적삽입위점불동,유사균주삽입료2개혹경다적고패.RT-PCR결과표명,외원기인재은이중능정상전록성RNA.
