CAJ | 학술논문

为更好地监测转基因抗虫水稻(Oryza sativa L.)Bt汕优63品系的存在,满足转基因标识管理的要求,同时也为了解决阳性植物基因组DNA不容易获得的问题,本研究采用热不对称交互PCR(TAIL-PCR)、Genome Walking和长链PCR(LD-PCR)方法测定了基因枪转化的转cry1Ab/cry1Ac融合基因水稻品系Bt汕优63的外源插入DNA全序列,构建了含有Bt汕优63 3′旁侧和水稻内标基因gos9序列的标准质粒分子pMDBt63作为标准物质,建立了Bt汕优63实时荧光定量PCR方法.外源插入DNA全长9 818bp,位于水稻基因组10号染色体(AP008214)第5348630位,由8个来源于两个转化质粒的DNA片段组成,其中两个cry1Ab/cry1Ac表达框以正向串连的方式插入.gos9和3′旁侧两个定量标准曲线的相关系数(R2)分别为0.9997和0.9992,扩增效率(E)分别为98.05%和99.46%.每反应100 ng模板DNA的检测限(LOD)为10拷贝,定量限(LOQ)为100拷贝.此外,对已知5%和1%转基因含量的混合样品DNA进行定量检测,结果的平均值分别为4.98%和1.07%.结果表明标准质粒pMDBt63作为标准物质建立的定量方法可用于Bt汕优63的定量检测.
위경호지감측전기인항충수도(Oryza sativa L.)Bt산우63품계적존재,만족전기인표식관리적요구,동시야위료해결양성식물기인조DNA불용역획득적문제,본연구채용열불대칭교호PCR(TAIL-PCR)、Genome Walking화장련PCR(LD-PCR)방법측정료기인창전화적전cry1Ab/cry1Ac융합기인수도품계Bt산우63적외원삽입DNA전서렬,구건료함유Bt산우63 3′방측화수도내표기인gos9서렬적표준질립분자pMDBt63작위표준물질,건립료Bt산우63실시형광정량PCR방법.외원삽입DNA전장9 818bp,위우수도기인조10호염색체(AP008214)제5348630위,유8개래원우량개전화질립적DNA편단조성,기중량개cry1Ab/cry1Ac표체광이정향천련적방식삽입.gos9화3′방측량개정량표준곡선적상관계수(R2)분별위0.9997화0.9992,확증효솔(E)분별위98.05%화99.46%.매반응100 ng모판DNA적검측한(LOD)위10고패,정량한(LOQ)위100고패.차외,대이지5%화1%전기인함량적혼합양품DNA진행정량검측,결과적평균치분별위4.98%화1.07%.결과표명표준질립pMDBt63작위표준물질건립적정량방법가용우Bt산우63적정량검측.