畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2004年
2期
186-191
,共6页
贝为成%何启盖%陈焕春%徐晓娟%洪文洲%肖少波%宋云峰%刘建杰
貝為成%何啟蓋%陳煥春%徐曉娟%洪文洲%肖少波%宋雲峰%劉建傑
패위성%하계개%진환춘%서효연%홍문주%초소파%송운봉%류건걸
胸膜肺炎放线杆菌%重组转移质粒%电转化%突变株%基因工程疫苗
胸膜肺炎放線桿菌%重組轉移質粒%電轉化%突變株%基因工程疫苗
흉막폐염방선간균%중조전이질립%전전화%돌변주%기인공정역묘
根据已发表的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清5型核苷酸序列设计并合成了一对引物,从自行分离的APP菌株PCR扩增apxⅡCA基因,将该片段与pBluescript SK(+)载体连接,得到质粒pSK-CA.另外,从质粒pIC-neo中得到的Ampr基因经XbaⅠ酶切消化后,克隆到pSK-CA中的XbaⅠ位点,获得了重组转移质粒pSK-CAmpr.pSK-CAmprDNA通过电转化导入亲本菌,电转化后的产物涂布于TM平板,可获得突变株.提取突变株和亲本菌基因组DNA,用PCR检测含有apxⅡC基因的胸膜肺炎放线杆菌染色体区域.从突变株基因组DNA扩增得到的一条PCR DNA片段比从亲本菌基因组DNA扩增得到的一条DNA片段大1.3 kb,增大的片段与所插入的Ampr基因大小相符合.用合成的Ampr基因引物从突变株基因组DNA中也能扩增到一条1.3 kb的特异性DNA片段.同时Southern blot鉴定有特异性带.这表明我们所构建的突变株是成功的.测定了突变株的遗传稳定性及突变株对动物的安全性,为进一步研究用其它报告基因置换Ampr基因后,研制单基因工程疫苗及以APP毒力缺失突变菌株为载体,表达外源基因的APP基因工程菌的研究奠定了坚实的基础.
根據已髮錶的豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌(APP)血清5型覈苷痠序列設計併閤成瞭一對引物,從自行分離的APP菌株PCR擴增apxⅡCA基因,將該片段與pBluescript SK(+)載體連接,得到質粒pSK-CA.另外,從質粒pIC-neo中得到的Ampr基因經XbaⅠ酶切消化後,剋隆到pSK-CA中的XbaⅠ位點,穫得瞭重組轉移質粒pSK-CAmpr.pSK-CAmprDNA通過電轉化導入親本菌,電轉化後的產物塗佈于TM平闆,可穫得突變株.提取突變株和親本菌基因組DNA,用PCR檢測含有apxⅡC基因的胸膜肺炎放線桿菌染色體區域.從突變株基因組DNA擴增得到的一條PCR DNA片段比從親本菌基因組DNA擴增得到的一條DNA片段大1.3 kb,增大的片段與所插入的Ampr基因大小相符閤.用閤成的Ampr基因引物從突變株基因組DNA中也能擴增到一條1.3 kb的特異性DNA片段.同時Southern blot鑒定有特異性帶.這錶明我們所構建的突變株是成功的.測定瞭突變株的遺傳穩定性及突變株對動物的安全性,為進一步研究用其它報告基因置換Ampr基因後,研製單基因工程疫苗及以APP毒力缺失突變菌株為載體,錶達外源基因的APP基因工程菌的研究奠定瞭堅實的基礎.
근거이발표적저전염성흉막폐염방선간균(APP)혈청5형핵감산서렬설계병합성료일대인물,종자행분리적APP균주PCR확증apxⅡCA기인,장해편단여pBluescript SK(+)재체련접,득도질립pSK-CA.령외,종질립pIC-neo중득도적Ampr기인경XbaⅠ매절소화후,극륭도pSK-CA중적XbaⅠ위점,획득료중조전이질립pSK-CAmpr.pSK-CAmprDNA통과전전화도입친본균,전전화후적산물도포우TM평판,가획득돌변주.제취돌변주화친본균기인조DNA,용PCR검측함유apxⅡC기인적흉막폐염방선간균염색체구역.종돌변주기인조DNA확증득도적일조PCR DNA편단비종친본균기인조DNA확증득도적일조DNA편단대1.3 kb,증대적편단여소삽입적Ampr기인대소상부합.용합성적Ampr기인인물종돌변주기인조DNA중야능확증도일조1.3 kb적특이성DNA편단.동시Southern blot감정유특이성대.저표명아문소구건적돌변주시성공적.측정료돌변주적유전은정성급돌변주대동물적안전성,위진일보연구용기타보고기인치환Ampr기인후,연제단기인공정역묘급이APP독력결실돌변균주위재체,표체외원기인적APP기인공정균적연구전정료견실적기출.
