CAJ | 학술논문

目的:探讨胚胎大鼠腹侧中脑区域神经干细胞(neural stem cell,NSCs)的分离、培养、传代及鉴定的方法.方法:分离E14.5胚胎大鼠腹侧中脑组织,用机械吹打方法形成细胞悬液,接种到含有表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、碱性成纤维生长因子(fibroblast growth factor-basic,bFGF)、B27(B27 suplement)的DMEM/F12(1∶ 1)的无血清培养液中培养,待形成原代克隆球后,用有限稀释法进行单细胞克隆和传代扩增,以获得大量来源相同的NSCs克隆球,并且进行Brdu和Nestin检测;然后取培养细胞诱导分化后行GFAP,NeuN,TH检测.结果:E14.5胚胎大鼠腹侧中脑组织细胞培养两周后可以形成较多的悬浮生长的神经球,经单细胞克隆和传代扩增后得到大量的同源细胞克隆球.经过Brdu和Nestin的免疫细胞化学检测90%以上的细胞呈阳性;诱导分化后细胞呈GFAP,NeuN阳性,少量细胞呈TH阳性.结论:从E14.5胚胎大鼠腹侧中脑组织分离得到的细胞具有不断增殖和自我更新的能力,是胚胎大鼠中枢神经系统的NSCs,并可以分化为TH阳性神经元.
목적:탐토배태대서복측중뇌구역신경간세포(neural stem cell,NSCs)적분리、배양、전대급감정적방법.방법:분리E14.5배태대서복측중뇌조직,용궤계취타방법형성세포현액,접충도함유표피생장인자(epidermal growth factor,EGF)、감성성섬유생장인자(fibroblast growth factor-basic,bFGF)、B27(B27 suplement)적DMEM/F12(1∶ 1)적무혈청배양액중배양,대형성원대극륭구후,용유한희석법진행단세포극륭화전대확증,이획득대량래원상동적NSCs극륭구,병차진행Brdu화Nestin검측;연후취배양세포유도분화후행GFAP,NeuN,TH검측.결과:E14.5배태대서복측중뇌조직세포배양량주후가이형성교다적현부생장적신경구,경단세포극륭화전대확증후득도대량적동원세포극륭구.경과Brdu화Nestin적면역세포화학검측90%이상적세포정양성;유도분화후세포정GFAP,NeuN양성,소량세포정TH양성.결론:종E14.5배태대서복측중뇌조직분리득도적세포구유불단증식화자아경신적능력,시배태대서중추신경계통적NSCs,병가이분화위TH양성신경원.